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2024年4月16日发(作者:mac版pycharm激活码)

第12卷 第5期

2021年9月

器官移植

Organ Transplantation

Vol. 12    No.5

Sep. 2021

·论著 

实验研究

·

大鼠左肺原位肺移植改良模型的学习曲线及步骤解析

唐宏涛 李偲涵 王俊杰 黄桁 徐琳 陈婷婷 刘眉涵 付思怡 田东

【摘要】 目的 

总结和解析大鼠左肺原位肺移植改良模型的关键步骤,为大鼠肺移植模型的建立提供更多

经验。

方法 

两名术者(术者A、B)分别连续做完整移植手术15例,并将每5例手术分为1个练习阶段。详

细记录各移植程序的操作时间,计算总体成功率和1周存活率在不同练习阶段之间的差异,并采用累积和法构

建学习曲线。

结果 

术者A、B首次移植成功的手术次数分别为第5次、第6次,移植总体成功率分别为80%

和87%,大鼠1周存活率均为92%。随着手术例数的增加,两名术者的心肺整体获取、套管制备、冷缺血、热

缺血、移植和总手术时间均呈下降趋势(均为

P

<0.05)。术者A、B分别有3只、2只大鼠因麻醉过度导致心

力衰竭死亡,各有1只大鼠分别于术后1 d、7 d死亡,死因分别为静脉扭曲和肺不张。累积和法拟合优度

R

2

别为0.992 8和0.976 6,两名术者分别于第7例和第8例移植手术时达到学习曲线拐点。

结论 

本课题组改良的

大鼠左肺原位肺移植模型在理论和技术上均具有良好的可操作性和可重复性,且具有学习曲线短、手术时间短、

受体存活率高且并发症少的优点,在肺移植基础研究领域值得进一步推广和应用。

【关键词】

 肺移植;动物模型;改良模型;套管技术;累积和法;学习曲线;“钟摆式”吻合法;步骤解析

中图分类号

】 R617,R563 【

文献标志码

】A 【

文章编号

】1674-7445(2021)05-0009-07

Learning curve and key procedures analysis of modified rat models of orthotopic left lung transplantation Tang Hongtao

*

, Li Caihan,

Wang Junjie, Huang Heng, Xu Lin, Chen Tingting, Liu Meihan, Fu Siyi, Tian Dong.

*

Heart and Lung Transplant Research Laborary, Affiliated

Hospital of North Sichuan Medical College, Nanchong 637000, China

Corresponding author: Tian Dong, Email: TianD_EATTS@

Abstract

Objective

To summarize and analyze the key procedures of the modified rat model of orthotopic

left lung transplantation, aiming to provide more experience for the establishment of rat models of lung transplantation.

Methods

Two surgeons (A and B) performed complete transplantation in consecutive 15 rat models, and every 5 surgeries

were divided into 1 practice stage. The operating time of each transplantation procedure was recorded. The differences

of overall success rate and 1-week survival rate were calculated among different practice stages. The learning curve was

delineated by the cumulative sum method.

Results

For surgeons A and B, the number of the first successful transplantation

was the 5th and 6th time, the overall success rates of transplantation were 80% and 87% respectively, and the 1-week

survival rates of rats both were 92%. Along with the increasing number of surgeries, the entire cardiopulmonary

procurement, cannula preparation, cold ischemia, warm ischemia, transplantation and total operation time by two surgeons

showed a significantly downward trend (all

P

<0.05). For surgeons A and B, 3 and 2 rats died of heart failure due to

overdose anesthesia, and 1 rat died of vein distortion at postoperative 1 d and 1 died of atelectasis at postoperative 7 d,

respectively. The goodness of fit (

R

2

) of cumulative sum method was 0.992 8 and 0.976 6. The turning point of learning

DOI: 10.3969/.1674-7445.2021.05.009

基金项目:医学影像四川省重点实验室开放课题(MIKLSP202007);南充市市校合作科研专项(19SXHZ0189);川北医学院附属医

院科研发展计划项目(2021ZK003);2021年四川省大学生创新创业训练计划项目(2)

作者单位:637000 四川南充,川北医学院附属医院心肺移植研究室(唐宏涛、李偲涵、王俊杰、黄桁、徐琳、陈婷婷、刘眉涵、付思

怡、田东);川北医学院附属医院院士(专家)工作站(田东)

通信作者:田东,男,博士,副主任医师,研究方向为肺移植基础与临床研究,Email:TianD_EATTS@

第5期

唐宏涛等.

大鼠左肺原位肺移植改良模型的学习曲线及步骤解析

·557·

curve was achieved in the 7th and 8th transplantation for surgeons A and B.

Conclusions

The modified rat model of

orthotopic left lung transplantation yields high operability and repeatability both theoretically and technologically,

and has multiple advantages of short learning curve, short operation time, high survival rate of the recipients and few

complications, which is worthy of application in the basic research of lung transplantation.

Key words

】 Lung transplantation; Animal model; Modified model; Cannula technique; Cumulative sum method;

Learning curve; "Pendulum" anastomosis; Procedure analysis

肺移植是终末期肺病唯一有效的治疗方式,肺移

植受者术后5年和10年生存率分别为54%和32%,

远低于其它实体器官移植受者

[1]

。肺移植术后多种

因素导致的严重并发症是影响肺移植受者总体生存

率的主要原因

[2-5]

,然而其具体致病机制仍未十分明

确。临床前实验动物模型的构建有助于探索肺移植术

后异常病理生理变化的潜在机制,进而制定新的诊治

策略。

尽管一些大型动物在肺移植程序和生理性质方面

与人体相似,但成本巨大、伦理争议较大和围手术期

的管理复杂阻碍了其应用

[6]

。相比之下,大鼠因其价

格低廉、繁殖快速、易于饲养和同基因遗传背景等优

势,受到许多移植科医师的青睐。随着Mizuta等

[7]

将套管技术引入啮齿类动物肺移植,大鼠左肺原位肺

移植及套管技术逐渐成为构建缺血-再灌注损伤、慢

性移植肺功能障碍、肺水肿等肺移植相关疾病模型的

首选

[8-11]

,同时也被广泛应用于体外肺灌注等前沿技

术的研究

[12-14]

,为肺移植基础研究提供了重要的动物

模型基础。目前,国内外许多研究都报道过大鼠肺移

植的改良模型,虽然经过多次外科训练后都能被移植

科医师所掌握,但多数改良模型的学习曲线长、可重

复性低,且可能伴随各种术后并发症,无经验的移植

科医师很难在短时间内熟练掌握,移植手术质量难以

保证

[6, 15-16]

本课题组前期对大鼠肺移植模型和套管技术进行

了多方位的改进

[17]

,该改良模型在降低手术难度、

缩短操作时间、降低并发症和提高生存率方面具有

显著优势。肺移植的每一步程序都可能决定模型建

立的成败和质量,深入解析其技术要点和操作难点对

外科训练是极其必要的,而目前尚无相关文献对大鼠

肺移植具体步骤进行详细介绍。本文将根据两名无移

植经验术者的学习过程绘制具体的学习曲线,并对手

术关键步骤进行详细解析,旨在进一步推广这种改良

模型,为建立肺移植基础研究动物模型提供更多的

经验。

1 材料与方法

1.1 实验动物

60只周龄7~8周、体质量约250 g的雄性SD大

鼠购于川北医学院实验动物中心。供体和受体大鼠体

质量分别为(223±4)g和(240±3)g。所有大鼠

于术前2 d放入无特定病原体(specefic pathogen free,

SPF)饲养环境,术前1 d禁食不禁饮,手术环境洁净,

术后将受体大鼠放回SPF环境继续常规饲养。大鼠肺

移植手术均于川北医学院附属医院心肺移植研究室完

成,并得到川北医学院伦理委员会的批准。

1.2 大鼠左肺原位肺移植改良模型的关键步骤

1.2.1 麻 醉

在诱导盒中采用不超过1.0 mL的吸入

性麻醉药异氟烷对大鼠进行麻醉诱导,待大鼠胸廓起

伏频率降低至约1次/秒且全身肌无力时,将其放置

在自制气管插管台弧面。

1.2.2 气管插管

用灯光透照大鼠颈前皮肤,配合镊子

暴露声门,插入自制气管插管(插管成功时有轻微连

续环状阻塞感,图1A)。连接小动物呼吸机进行持

续通气和麻醉维持。

1.2.3 心肺整体获取

剪开胸腹部皮肤至下颌,再行正

中开腹至剑突,沿肋缘剪开膈肌暴露下腔静脉,缓慢

向下腔静脉注射500 IU肝素钠,待3~5 min后实现全

身肝素化。沿胸骨体两侧血管走向行胸骨切开术,剪

去部分胸腺,随后离断下腔静脉,并剪破左心耳和肺

动脉根部,使用器官保存液缓慢灌注全肺直至供肺基

本呈白色(不超过15 mL,图1B)。在呼吸机呼气

相时拔出气管插管,使供肺内充满约50%的气体以

防止冷缺血期间肺不张,离断气管后,朝大鼠尾部方

向游离心肺整体,注意避免损伤食管污染供肺。

1.2.4 游离左肺

全程于碎冰上进行,心肺整体呈“反

体位”(左肺位于术者左侧,右肺位于右侧),用灌

注液浸湿的吸水纸润湿和包裹供肺(图1C)。在气

管隆嵴处离断左主支气管,若左肺迅速萎缩,则表示

左肺灌注和通气良好;沿迷走神经方向分离肺动脉,

·558·

器官移植

第12卷

随后连同部分左心房离断肺静脉以保证足够的长度;

仔细游离肺门三支(左肺主支气管、左肺动脉、左肺

静脉)结构,尽量避免对肺静脉的过度处理。

1.2.5 供肺套管制备

采用“单向式”依次处理肺静

脉、左主支气管和肺动脉,套管制备方法见前期研

[17]

。横断部分左主支气管软骨环,使膜部在无张

力时与软骨环高度一致;套管尾部朝向供肺前缘,将

血管或支气管外翻至套管周围后,套入预先准备好的

滑结并打结;将套管制备完成后的供肺用上述吸水纸

包裹,存于低温环境待用(图1D、E)。

1.2.6 受体移植

受体大鼠呈右侧卧位,于心尖搏动最

明显处作胸部切口,用撑开器扩大胸腔视野,采用无

损伤侧壁钳钳夹肺门三支远心端并固定,打开纵隔胸

膜时注意保护膈神经(图1F);仔细游离肺门三支

至近心端以保证血管和支气管的长度,肺静脉应彻底

游离至肺血管底部;用另一把无损伤侧壁钳钳夹肺门

三支近心端,使肺门平面与水平面呈20°左右夹角;

于肺动脉前壁上段行“丄”形切口,于支气管和肺静

脉上、下分支内侧壁行 “V”形切口,排空管腔液体

1G);若肺静脉主干较短,可在其下分支作“丄”

形切口。将供肺置于远心端无损伤侧壁钳上,覆以上

述吸水纸起牵引作用;移植前用细棉条排除支气管内

液体防止栓塞;移植吻合采用“钟摆式”吻合法,即

先吻合支气管,再以支气管为中轴,将供肺向肺动脉

和肺静脉依次摆动,保证所有套管在无张力情况下进

行嵌入和吻合,避免移植过程反复吻合造成的血管撕

裂(图1H);肺复张前修剪受体自体肺门三支结构

残端以防止肺不张等并发症;关胸时应密闭大鼠肋间

隙以恢复胸腔负压(图1I),详见前期研究

[17]

1.3 研究方法

肺移植手术均由单人操作。自首次成功完成大

鼠左肺原位肺移植起,两名无移植经验术者(术者

A和术者B)利用课题组改良的肺移植模型分别连

续行完整移植手术15例,每5例手术为一个练习阶

段,详细记录各移植程序(包括心肺整体获取、套管

制备、冷缺血、热缺血和移植)的操作时间以及大鼠

的存活情况和并发症情况。移植时间定义为受体大鼠

做切口开始至受体大鼠切口缝合完毕的时间间隔,大

鼠移植总体成功率=(手术成功例数/总手术例数)

×

100%,1周存活率=(术后1周存活大鼠数/术后

顺利苏醒大鼠数)

×

100%,其余时间定义及手术器

械参照本课题组前期研究

[17]

使用累积和(cumulative sum,CUSUM)法构

建学习曲线,将各移植程序的操作时间作为参考指

标,并将其量化值分别定义为

δ

1

δ

2

δ

3

δ

4

δ

5

计算各项参考指标的平均值(

i

i

=1,2,3,4,5),≥

i

的数据所占比例为失败率(

F

i

)。对于第

n

例手

术,若

x

i

i

δ

1

=1-

F

i

;反之

δ

i

=0-

F

i

。定义每例手

术的5项量化指标和为∑(

n

)。每例手术的CUSUM

值:CUSUM(

n

)=∑(

n

)+CUSUM(

n

-1)。

1.4 统计学方法

采用SPSS 25.0软件进行统计学分析,GraphPad

Prism 9.1.0绘制学习曲线。符合正态分布的计量资料以

均数±标准差表示,方差齐的数据比较采用单因素方

差分析,方差不齐的数据比较采用Jonckheere-Terpstra

检验,两两比较均采用Bonferroni法(α’=0.05/3)。

检验水准α=0.05。

2 结 果

2.1 不同术者各移植程序时间和移植结果比较

术者A、B自开始练习起,首次移植成功的手术

次数分别为第5次、第6次,最终移植总体成功率分

别为80%(12/15)和87%(13/15),大鼠1周存活

率分别为92%(11/12)和92%(12/13)。随着手术

例数的增加,术者A、B的各移植程序时间和总手术

时间均呈下降趋势,且总手术时间在各练习阶段间差

异均有统计学意义(

P

<0.05,表1)。

术者A、B每次气管插管均一次性成功,移植吻

合成功率100%,术中无气管、血管撕裂。术者A、

B操作的手术中分别有3只、2只大鼠因麻醉过度导

致心力衰竭死亡,各有1只大鼠于术后1 d、7 d死亡,

尸检后确认死因分别为静脉扭曲和肺不张。少数大鼠

术后存在不同程度的湿啰音,多数大鼠术后存在呼吸

急促、食欲减退、运动减少现象,随后均逐渐恢复。

2.2 不同术者的CUSUM学习曲线比较

经非线性拟合,两名术者的学习曲线符合四次方

曲线规律,拟合优度

R

2

分别为0.992 8和0.976 6。

两名术者先后于第7例和第8例移植手术时抵达学习

曲线拐点,术者A,第1~7例为学习提高阶段,第

8~15例为熟练掌握阶段;术者B,第1~8例为学习

提高阶段,第9~15例为熟练掌握阶段(图2)。

3 讨 论

自套管技术被引入啮齿类动物肺移植以来,大鼠

(图

第5期

唐宏涛等.

大鼠左肺原位肺移植改良模型的学习曲线及步骤解析

·559·

ABC

DEF

GHI

注:A图示气管插管;B图示供肺灌注;C~E图示游离左肺及制备套管;F~I图示受体移植。

图1 大鼠左肺原位肺移植手术步骤

Figure 1 Surgical procedures for orthotopic left lung transplantation in rats

表1 两名术者肺移植各阶段操作时间

Table 1 The operating time of each stage of lung transplantation from two surgeons (±

s

, min)

移植程序

时间

术者A

阶段Ⅰ阶段Ⅱ

10.6±1.4

25.1±2.8

51.7±2.8

23.6±7.5

a

53.0±6.2

a

88.8±9.0

a

阶段Ⅲ

8.8±0.7

a

17.8±3.1

a, b

43.7±2.6

a,b

13.1±3.5

a

42.2±3.0

a, b

68.7±4.5

a, b

P

0.006

0.038

0.017

<0.001

<0.001

<0.001

阶段Ⅰ

16.9±1.6

48.9±2.1

84.9±1.2

34.1±2.0

74.0±2.1

139.8±4.3

术者B

阶段Ⅱ

16.0±0.8

39.2±7.3

a

69.9±12.7

a

33.0±7.0

66.9±11.4

122.1±14.1

a

阶段Ⅲ

12.2±1.7

a, b

22.4±6.2

a, b

43.8±3.4

a,b

21.3±11.1

a, b

44.2±11.3

a, b

80.7±14.2

a, b

P

<0.001

<0.001

<0.001

0.039

0.001

<0.001

心肺整体获取时间 11.4±1.8

套管制备时间

冷缺血时间

热缺血时间

移植时间

总手术时间

23.5±5.9

52.9±8.8

41.2±11.3

73.2±8.5

108.8±10.8

注:与阶段Ⅰ比较,

a

P

<0.05/3;与阶段Ⅱ比较,

b

P

<0.05/3。

·560·

15

器官移植

15

第12卷

10

C

U

S

U

M

C

U

S

U

M

10

5

5

0

0

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

手术例数

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

手术例数

-5

A

-5

B

注:A图为术者A的CUSUM学习曲线,B图为术者B的CUSUM学习曲线。

图2 术者A、B的CUSUM学习曲线

Figure 2 The CUSUM learning curves of surgeon A and B

左肺原位肺移植模型已被广泛应用于肺移植基础研究

领域

[12-14, 18-21]

。近年来有多项研究对大鼠肺移植模型

进行改进,但部分关键步骤未被详细介绍,无经验的

移植科医师难以快速掌握该项技术,这不仅浪费时间

成本与动物资源,还会对术者信心造成极大影响。本

课题组前期对大鼠肺移植模型及套管技术进行了多方

位改良,本文深入解析了该改良模型建立的关键步骤,

并成功绘制其学习曲线,旨在进一步推广该项技术,

为大鼠肺移植模型的建立提供更多学习经验。

大鼠肺移植需要持续的机械通气和麻醉,故气管

插管是手术取得成功的首要前提。大鼠体型较小,难

以直接观察其喉口和声带,盲探气管插管失败易导致

大鼠喉头水肿、黏液堵塞声门、恢复声门反射,甚至

因呼吸衰竭而死亡

[22-23]

。既往的气管插管台多为斜面,

在插管时需复查,耗时较长

[23-24]

。本模型采用弧面自

制气管插管台,利用丝线悬挂大鼠上切牙,使其颈部

呈后仰状态。灯光透照大鼠颈前皮肤使声门和喉口可

视化,可有效降低气管插管误入食管或损伤口咽的风

险。本模型采用的气管插管由14 G静脉留置针管制成,

其管径大小大致与体质量250 g左右大鼠的气管管腔

相匹配,降低了气管漏气或撕裂的发生率。根据两名

术者的移植经验,配合自制气管插管台的气管插管操

作简单、易于学习,熟练掌握后不到10 s即可完成。

恰到好处的供肺灌注是大鼠供肺术后实现正常

氧合的重要保障,灌注速度、供肺通畅程度和通气幅

度是影响灌注质量的主要因素。灌注速度过快极易导

致肺水肿,而灌注液流出受阻或双肺通气不良,则很

难排出残余血液。Pieróg等

[25]

将灌注液用量设定为

20 mL,但即使是体质量相当的大鼠,其肺部体积和

结构仍存在巨大差异,定量灌注极易导致灌注过度或

不足,进而严重影响供肺质量。本模型首先保证供肺

灌注过程平缓,灌注时间控制在1 min内,灌注液不

超过15 mL

[17]

,可有效避免肺水肿和肺淤血等并发症。

经测试,当供肺被灌注至呈雪白色且流出液澄清或少

血色时效果最佳。当局部供肺难以灌注彻底时,切忌

随意更改灌注量和灌注速度。此外,灌注前使大鼠全

身肝素化、灌注时保留呼气末正压也有助于促进灌注

进程和改善供肺质量。

套管制备是受体移植前的关键步骤,既往研究

显示,套管过小容易引起血管血栓和肺不张

[6, 15-16, 22]

本模型套管由14 G和16 G静脉留置针管制成,且表

面被打磨粗糙,有利于套管体和支气管、血管壁之间

的紧密结扎。根据两名术者所操作的移植手术结果,

仅1只大鼠于术后1周内出现肺不张,考虑为支气管

扭曲所致。Guo等

[22]

建议在套管制备时剪掉套管尾

部以减少并发症,但该操作增加了吻合难度,同时容

易引起供肺损伤。本模型将套管尾部裁剪成弧形,以

防止术中、术后对肺实质或血管的意外损伤,术后未

发现因套管原因引起的各种并发症。此外,少数研究

报道了供肺套管制备所用器械,但均对供肺有不同程

度的压迫,且供肺容易摆动,操作时间较长

[15-16]

。本

模型套管制备在自制套管制备盘中进行,极大增加了

套管制备的稳定性。此外,既往模型大多优先处理肺

动脉

[6, 16]

,但解剖上肺静脉通常较短,优先处理肺动

脉极易造成移植后供肺与纵隔平面成角。本模型采用

“单向式”原则,首先制备肺静脉套管,并将支气管

第5期

唐宏涛等.

大鼠左肺原位肺移植改良模型的学习曲线及步骤解析

·561·

和肺动脉修剪至与肺静脉相当的长度。基于改进后的

套管及套管制备盘,本模型套管制备所需时间大大减

少,制备过程基本无压迫,且术后所有大鼠未发现成

角等并发症。

受体移植是大鼠肺移植的核心步骤,受体胸部

切口位置不当、血管撕裂和扭转、套管滑脱、管腔折

叠等均可能导致手术的彻底失败。既往研究大多以

大鼠肋间隙和肩胛骨下缘为体表特征以确定切口位

[11, 15-16, 22, 26]

,但实际操作中难以准确定位这些体表

特征。本模型于心尖搏动最明显处作切口,可充分暴

露受体左侧肺门。关于吻合顺序,既往研究多采用“单

向式”吻合肺门三支

[15, 27]

,但该方法极易增加套管

嵌入受体管腔后产生的张力,进而导致套管反复滑出

和血管撕裂。本模型采用的“钟摆式”吻合法可显著

减小吻合时的血管张力,极大地降低了吻合难度

[17]

肺静脉吻合通常被认为是大鼠肺移植中最困难的步骤,

肺静脉长度较短、收缩性差、易撕裂,给大鼠肺移植

带来巨大的挑战。既往研究常通过缝线悬吊或牵引法

来固定供体肺静脉套管

[7]

,但此举破坏了肺静脉的完

整性,使其更容易撕裂。本模型构建过程中,术者首

先通过“连同部分心房离断供肺肺静脉”和“将肺静

脉彻底游离至肺血管底部”的方法以增加供、受体静

脉长度;此外,术者在肺静脉下分支作“丄”形切口,

顺利吻合后再连同上分支一同结扎

[17]

;同时,适当

保留肺静脉表面的结缔组织可增加其韧性,进而防止

吻合时的撕裂

[22]

。既往研究均未涉及供肺再通气和

再灌注前对受体肺门三支残端的处理,肺门三支残端

可能会因弹性回缩导致供肺肺门血管、支气管受压迫,

故在肺复张之前修剪受体自体肺门三支结构残端可有

效预防肺不张、血流阻塞等术后并发症。基于以上改进,

本模型移植肺术后血栓形成、供血不足或气道压迫的

发生率显著降低,极大提高了受体移植的成功率。

充分了解大鼠肺移植外科训练进度对术者的移

植计划和信心提升具有重要作用。基于课题组的改良

模型,随着手术例数的增加,本研究两名术者各移植

程序操作时间和总手术时间均呈下降趋势,且总手术

时间在各练习阶段间差异均有统计学意义,移植总

体成功率(80%和87%)和大鼠1周存活率(均为

92%)也较既往研究明显提高

[7, 22]

,这充分表明该模

型具有高度的可操作性和可重复性。CUSUM被广泛

应用于构建动物模型或手术方法的学习曲线

[28]

。大

鼠肺移植的每个移植程序都能独立影响手术最终结果,

因此将移植程序完整纳入参考指标能更准确地反映术

者的学习情况,本研究中两名术者的CUSUM学习曲

线可分为学习提高阶段和熟练掌握阶段。在学习提高

阶段,术者操作相对生疏、耗时较长;随着练习阶段

的推进,两名术者对模型构建方法、手术器械以及实

验设备进一步熟悉,最终跨越学习曲线拐点(分别为

第7次和第8次),逐渐熟练掌握该模型,最终,相

对其他同类研究,本模型显著减少了手术操作时间,

极大缩短了学习曲线

[6, 16, 22]

综上所述,本课题组改进后的大鼠左肺原位肺移

植模型在理论和技术上均具有良好的可操作性和可重

复性。基于术者学习曲线短、受体存活率高且并发症

少、成本低廉等优点,本模型将促进大鼠左肺原位肺

移植技术的推广发展和经验学习,并为肺移植相关疾

病的基础研究提供一个稳定可靠的平台,在未来肺移

植临床药物治疗和病理生理变化研究等方面具有较大

应用潜力。

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(收稿日期:2021-05-15)

(本文编辑:林佳美  吴秋玲)


本文标签: 移植 大鼠 模型 套管 灌注