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2024年6月28日发(作者:replace有被动语态吗)

Vol.

11

,

No.

1

Jan.

,

2021

环境工程技术学报

Journal

of

Environmental

Engineering

Technology

11

1

2021

1

杨凯

张硕

崔康平

等•活性污泥胞外聚合物中蛋白

质定量方法的评价&

J

•环境工程技术学报

,

2021

,

11

(

1

):

144-150.

YANG

K

,

ZHANG

S

,

CUI

K

P,

et

al.

Evaluation

of

protein

quantification

metUods

for

extracellular

polymers

in

activated

sludge

&

J

'.

Journal

of

Environmental

Engineering

Technology

,

2021

,

11

(

1

)

:

144-150.

活性污泥胞外聚合物中蛋白质定量方法的评价

杨凯

1

,

张硕

2

崔康平

1

,

黑生强

2

吕学敏

2

,

宋广清

2

,

张弦

2

黄霞

2

*

1.

合肥工业大学资源与环境工程学院

2

.

环境模拟与污染控制国家重点

合实验室

清华大学环境学院

摘要

胞外聚合物

(

EPS

)

中蛋白质的准确定量对研究活性污泥性质具有重要意义

为对

EPS

中蛋白质定量方法的选择提供

依据

,系统评价了

Modified

Lowry

BCA

Bradford

法的测试性能

包括测试范围

准确度

精密度及对

EPS

中部分组分

(

Cf

2+

Mg

u

还原性糖

腐殖酸)的抗干扰性

结果表明:

Modified

Lowry

法在蛋白质浓度为

1

~

10

.

10

-

100

mg/L

时与吸光度

的线性相关性较好

(

4

>0.

99

)

,

BCA

法和

Bradford

法的测试范围较

Modified

Lowry

法更宽

;

Modified

Lowry

法的准确度和精密

度均最高

,

BCA

法次之

Bradford

法最低;

Modified

Lowry

法受

Ca

2+

Mg

2u

和还原性糖干扰

BCA

法受还原性糖和腐殖酸干扰

Bradford

法受腐殖酸的干扰。

因此

,

EPS

中蛋白质定量方法的选择应从样品性质(蛋白质浓度范围

干扰物质种类及浓度)和

测试方法性能(测试范围

准确度

精密度和抗干扰性

)

2

个方面综合考虑

-

关键词

胞外聚合物;蛋白质定量

;

Modified

Lowry

法;

BCA

Bradford

中图分类号

:

X703.

1

文章编号

1674N91X(2021

)01-0144-07

doi

10.

12153/j.

issn.

1674N91X.

20200046

Evaluation

of

protein

quantitcation

methods

for

extracellular

polymers

in

activated

sludge

YANG

Kai

1

,

ZHANG

Shuo

2

,

CUI

Kangping

1

,

HEI

Shengqiang

2

,

LtiXuemin

2

,

SONG

Guangqing

2

,

ZHANG

Xian

2

,

HUANG

Xi

2

*

1.

School

of

Resources

and

Environmental

Engineering,

Hefei

University

of

Technology

2.

State

Key

Labomtorg

of

Environmental

Simulation

and

Pollution

Control,

School

of

Environment,

Tsinghua

University

Abstrace

Tha

accurata

quantificetion

of

proteins

in

extracellulav

polymeVc

substancas

(

EPS)

is

of

great

signigcenco

fov

studying

tUa

pmpertias

of

activated

sludgy.

To

proviga

a

basis

fov

tha

selection

of

protein

quanioocaioon

meihodson

EPS,iheiesipeeoemanceo/Modooed

Loweymeihod,

BCAmeihod,

B

ead

oed

meihod

was

sysimOicOly

evaluated,

including

tUa

test

rangy,

accumcy,

precision

and

tha

anti-inteVerenco

of

soma

componenis(Ca

2

u

,Mg

2

u

,eeducongsugaeand

humocacod)on

uaisondocaied

ihaiiheModooed

Lowey

meihod

showed

agood

aoneaeco

e

eaaioon

beiween

peoieon

concenieaioon

and

absoebanceon

iheeangeo/peoieon

concentration

of

1

-10

and

10-100

mg/L

(

R

2

>0.99)

)

and

tha

test

rangy

of

BCA

metUod

and

Bradford

method

was

d

Loweymeihod had

ihehoghesiaccueacyand

peecosoon,BCA

meihod

eanked

ihesecond,and

Bead

oed

meihod

s,Modooed

Loweymeihod

wasaecied

byCa

2

u

,Mg

2

u

and

eeducongsugae;

BCAmeihod

wasaecied

byeeducongsugaeand

humocacod;and

Bead

oed

meihod

wasaecied

byhumocacod.

Therefora,

tha

choice

of

protein

quantigcation

method

in

EPS

should

ba

compmhensiely

considered

from

tUa

two

aspecisoosampaepeopeeioes(peoieon

con

ien

i

eange,

on

ie

eoe

eence

spec

oes

and

concenieaioon

)and

iesimeihod

peeooemance(iesieange,accueac:,peecosoon

and

anio-onieeoeeence).

收稿日期

2020-13-09

基金项目

科学技术部中日国际项目

(

2016YFE0118500

)

作者简介:杨凯

(

1993

—)

硕士

研究方向为膜污染机理

,

yangkai986155252@

163.

com

*

责任作者

:黄霞

(

1965

)

教授

博士

研究方向为膜法水与废水处理新技术的研究与应用

,

xhuang@

tsinghua.

edu.

cn

1

杨凯等:活性污泥胞外聚合物中蛋白质定量方法的评价

-

145

-

Key

words

extracellular

polymeric

substances;

protein

quantification;

ModVied

Lowry

method;

BCA

method;

Bodford

method

活性污泥法是污水处理中最常用的技术

主要

利用活性污泥的生物凝聚

吸附和氧化作用去除水

中污染物

胞外聚合物

(

extocellulos

polymeric

substances

,

EPS

)

是活性污泥的主要成分之一

,

对活

性污泥的结构

絮凝性

沉降性

表面电荷和脱水性

能等均具有重要影响

&

1-

'

EPS

的组成主要包括蛋

碳水化合物

腐殖质

DNA

及其他小分子物

质&其中

蛋白质被认为与

EPS

的结构和功能

均有重要联系

&

6

,

Wu

等⑼研究认为污泥絮凝体的

结构及稳定性与

EPS

中蛋

质浓度和种类有关

;

Felipe

&

10

'

研究认为活性污泥沉降性能的改变与

EPS

中蛋白质浓度变化有关

-

因此

,

EPS

中蛋白质

的准确定量对研究活性污泥性质具有重要意义

-

EPS

中蛋白质的量化存在较大差异

一方面与

EPS

的提取方法有关

&

11

'

另一方面与

EPS

中蛋白质

的不同定量方法有关

-

蛋白质的定量方法较多

包括凯氏定氮法

荧光

分析法

双缩月尿法

Lowry

Modified

Lowry

BCA

BT

(

foO

法等

&

12T8

'

其中

Modified

Lowry

BCA

BadfoO

法具有测试操作简便

,测试准确性较高

等优势

已被广泛用于废水中蛋白质的定量

&

19-1

'

-

但这

3

种方法的测试范围

准确度

精密度均存在差

此外

3

种方法可能受到

EPS

中部分组分的

干扰

Shen

&

22

'

报道了

Co

2+

Mg

2u

Modified

Lowry

法的准确性存在影响

Feiz

&

23

'

报道了活性

污泥中存在还原性糖将影响

BCA

法的测试结果;

Le

等&

24

'认为腐殖酸会对

BCA

法和

Bodford

法的测试

产生干扰

但目前对上述

3

种方法的测试范'

精密度和

性污

EPS

干扰能力的系统评价鲜见报道

笔者评价了

Modified

Low

BCA

法和

Bodford

法的测试范

'

准确度

精密度及对活性污泥中

Co

2u

Mg

2u

EPS

定量方法的选择提供依据

-

1

材料与方法

1.

1

Modified

Lowry

Modified

Lowry

法是由

Fylund

&

15

'

Low

基础上针对腐殖酸干扰提出的改进方法

Low

的原理是在碱性介质中蛋白质将

Cu

2+

还原成

Cu

+

产生

Cu

+

-

复合物

该复合物与

Folin

试剂发生

显色反应

其颜色深浅与蛋白质浓度成正比

采用比

色法在

750

nm

波长下测定吸光度(

I

)

&

24

'

-

为减少

Modified

Low

法测试时间

Shen

&

22

'

提出的测试流程和试剂用量进行了改进

,提出

如图

1

所示的测试步骤

质吸光度的计算公式

见式

(

1

)

〜式

(

3

)

试剂的配制见表

1

-

Modified

Lowry

[0.35 mL

试剂

1

0.25

mL

样品

]

(

0.25

mL

样品

0.35

mL

试剂

2

]

(

~~

J

][

~~

J

]

J

J

[

静置

10

min

]

(

静置

10

min

[

力蛋白质

1

Modified

Lowry

法的测

步骤

Fig.

1

Test

procedure

for

Modified

Lowy

method

1

CuSO

4

蛋白质

+

1

腐殖酸

(

1

)

1

1

不加

CuSO

4

2

x

I

蛋白质+加腐殖酸

(

2

)

白质

-

1

-

25

X

(

蛋加

CuSO

4

-

蛋不加

CuSO

4

)

(

3

)

1

Modified

Lowry

Table

1

Preparation

of

test

reagents

for

Modified

Lowy

method

试剂名称

配制过程

A

0.

57

g

NaOH

2.86

g

Na

2

CO

3

加超纯水定容至

100

mL

B

1.

43

a

CuSO

4

-

5H

2

O

加超纯水定容至

100

mL

C

2

-

85

g

NgC

4

O

6

-

2H

2

O

加超纯水定容至

100

mL

1

将试剂

A

B

c

以体积比

100

1

1

混合

(

试剂

B和试剂

C

先混合

)

2

将试剂

A

纯水、

试剂

C

以体积比

100

1

1

混合

3

Folin-

酚(

2N

)

试剂和纯水以体积比

1

1

混合

1.2

BCA

测试原理:在碱性条件下蛋白质将

Cu

2+

还原成

Cu

+

Cu

+

BCA

分子结合生成紫色络合物

其颜色深

浅与蛋白质浓度成正比,采用比色法在

562

nm

波长下

测定

-

测试步骤:取

20

"

L

样品置于酶标板中

加入

200

-

146

-

环境工程技术学报

11

"

L

BCA

工作液(某品牌试剂盒)

室温

(

25

±2

)

下静

120

min

,

562

nm

波长下测定吸光度

1.

3

Bradforr

测试原理:考马斯亮蓝

GN50

染料在酸性条件与

精氨酸

组氨酸

苯丙氨酸

色氨酸和酪氨酸残基相互

作用显色&刃

颜色深浅与蛋白质浓度成正比

采用比色

法在

595

nm

波长下测定吸光度

-

Mg

2u

(

0

1

2

5

mmol/L

)

,

葡萄糖(

0

1

2

5

mmol/L

)

,

殖酸(

0

10

20

50

100

mg/L

)

BSA

的混合溶液

3

种定量方法测定混合溶液的吸光度,每个样品设置

3

次平行

(

=3

)

1.5

仪器与试剂

吸光度测定使用

MD

SpectmMax

型多功能酶标仪

测试步骤:移取

5

"

L

样品至酶标板中

加入

250

"

L

考马斯亮蓝

G-250

染色液(某品牌试剂盒

)

在室温

下静置

10

min

,

595

nm

波长下测定吸光度-

1.

4

蛋白质定量方法测试性能评价

1.4.1

浓度测试范围评价

配制

0-1

.

1-10

.

10-100

.

100

-

2

000

mg/L

4

组浓

(美国

Molecuav

Devicas

公司)可见光分光光度模块-

氯化钙

(

CaCt

2

0

)

氯化镁

(

MgCl

-

6

0

)

葡萄糖

(

C

6

H

2

O

6

0

)

硫酸铜

(

C

u

SO

/

5

0

)

酒石

酸钠

(

Na

2

C

O

6

2H

2

O

)

均为分析纯

购自国药集团化

学试剂有限公司

BSA

Folin-

试剂

(

2N

)

购自

Sigma-

AldVch

(上海)贸易有限公司;腐殖酸购自

MACKLN

度梯度牛血清蛋白#

bovina

serum

albumin

,

BSA

)

标准

溶液

考察

3

种方法在不同

BSA

浓度范围内与吸光度

的线性相关性

,

环样品设置

3

次平行(

=3

)-

1.4.2

准确度和精密度评价

在浓度测试范围评价的基础上

选定

3

种方法相

BSA

度范围,

3

测试

性范围内准确度和精密度,每个样品设置

8

次平行

(%

=8

)

准确度由相对误差

(

relative

exor

,

RE

)

衡量

采用

T

检验对测试值和真实值进行差异性检验

检验

假设为测试值和真实值有显著性差异

检验参数

P

大表明测试值与准确值差异性越小

精密度由相对标

准偏差

(

relative

standard

deviation

,

RSD

)^!^-

1.4.3

抗干扰性评价

分别配制不同浓度的

Co

2u

(

0

1

2

5

mmol/L

),

(上海

)

生化科技有限公司

BCA

试剂盒和

Bradford

剂盒均购自某生物技术公司;试验用水均为超纯水

2

结果与讨论

2.1

测试范围评价

BSA

0

-1

1

-10

10

-100

100

-1

000

mg/L4

度与

果如表

2

所示

由表

2

可见,

Modified

Lowry

法在

BSA

浓度为

1

~

10

10-100

mg/L

时有较好的线性相关性

(

R

2

>0.99

),

BCA

法在

BSA

浓度为

10-100

100

-

2

000

mg/L

范围内线性相关性较好

(

4

>0.99

),

Bradford

法在

BSA

浓度为

20-100

100

~

1

500

mg/L

范围内线性相关性较好

(

4

>0.

99

)

-

2

3

种方法不同

BSA

浓度范围的线性相关性比较(

=3

)

Table

2

Comparison

of

linecv

correlafon

of

iree

metUods

wii

dOemnt

BSA

conceneation

ranges

(%

=3)

方法

BSA

浓度

/(

mg/

)

0-1

BSA

浓度线性范围

/(

mg/L

)

拟合方程

c

=

-0.

004

5

l

+0.016

线性相关系数

(

4

)

0.357

2

0.992

8

Modoooed

Lowey

1-10

0-10

C

=0.005

1

x+

0.

010

10

-10010

-100

y

-U.

UU3

9

x

+

U.

0230.996

0

0.202

4100

-2

000

0-1

BCA

C=0.

000

2%+0.

051

y

-0.

001 3

l

+

0

0980.300

3

0.490

9

0.991

3

0.993

7

0-10

10

-100

000

7

%

+0.134

10

-100

100

-2

000

y=0.

001 6

l

+0.126

y

-0.

001

0

x

+

0

266

100

-2

000

0-1

y-0.

008

1

1

+0.445

y

=

-0.

000

5

l

+0.477

0.310

8

0.094

4

0.990

3

0.992

1

0-10

Bradford

10

-100

20

-100

100

-1

500

y

-0.

000

8

l

+

0

466

y

-0.

000

4

x

+

0

538

100

-2

000

2.2

准确度和精密度评价

在确定测试范围的基础上

3

种方法共同测试

范围

(

20

-

100

mg/L

)

内选定

BSA

浓度为

50

100

mg/L

,

对比定量方法的准确度和精密度

结果见图

2

-

1

杨凯等:活性污泥胞外聚合物中蛋白质定量方法的评价

-

147

-

准确度和精密度对比见表

3

由表

3

可知

,

3

种定量方

BCA

法和

BodfoO

异性检验

(

P

)

表明

,

3

法的准确度由高到低依次为

Modified

Low

.

BCA

BodfoO

;

精密度由高到低依次为

Modified

Low

56

方法的测试值与真实值的差异程度由低到高依次为

Modified

Low

BCA

法和

Bodford

54

52

50

48

46

44

42

40

38

Modified

Lowry

BCA

Bradfrd

Modified

Lowry

BCA

Bradfrd

(a)

真实值为

50

mg/L

(b)

真实值为

100

mg/L

2

3

种方法定量

50

(

100

mg/L

BSA

的测试数据分布

(%

=8

)

Fig.

2

Distobution

of

test

date

by

three

methods

to

quantify

50

and

100

mg/L

BSA

(

n

8

)

3

3

种方法的准确度和精密度比较

(

%=8

)

Table

3

万医

Modified

L

ow

Compadson

of

test

accuracy

and

pocision

of

thoe

methods

(

n

q8

)

BSA

浓度为

50

mg/L

BSA

100

mg/L

RE/%

P

RSD/%

2.40

3.66

9.28

RE/%

P

RSD/%

0.72

2.92

0.433

0.064

0.06

2.67

0.989

0.007

0.008

1.70

2.07

4.10

BCA

Bradford

7.72

0.005

4.97

2.3

抗干扰性的评价

2.3.1

Co

2+

Mg

2

+浓度的影响

采用

Modified

Low

BCA

法和

BodfoO

法测定

含不同浓度

Co

2+

Mg

2+

BSA

溶液的吸光度

建立

0

1

o

2

A

40

°-

0

o

-

5

o

0

°-

0

3

0

5

0

-

0

-

5

d

0

d

5

-

0

-

5

d

0

o

20

40

60

BSA

度与

拟合

,

拟合

标准曲线(不加干扰物质时的拟合曲线)判断

Co

2+

Mg

2

^tW

测试方法的干扰程度

结果如图

3

和图

4

o

l

>

06

m

m

m

m

2

r

2=0.995

0

7?

2

=0.995

0

7?

2

=0.995

0

=0.994

0

80

100

(b)

BCA

BSA

浓度

/(mg/L)

(a)

Modified

Lowry

(c)

Bradford^

3

含不同浓度

Ca

2

+

BSA

浓度与吸光度的拟合曲线(

=3

)

Fig.

3

Fitting

cuoes

of

BSA

concentration

and

absorbance

wth

diVeont

concentrations

of

Co

2

+ (

n

3)

由图

3

(

o

)

可见,

Modified

Low

法在

Co

2+

浓度分

别为

1

.

2

.

5

mmol/L

拟合曲线较标准曲线向下偏移

较大,即吸光度测试值偏低

导致蛋白质定量结果偏

低,且干扰程度随

Co

2

+

浓度增加而增大

此外,

@

2

+

-

148

-

环境工程技术学报

oo

o

o

o

o

O

O

3

X+

0.

3

X+

0.

3

X+

0.

3

X+

0.

o

13

14

o

14

o

15

O

11

1/L

1/L

1/L

)1/L

-

o0

o2

5

_

o20

-

OJ

5

CQ

o

1

mmol/L

2

mmol/L

5

mmol/L

0.40

-

0.62

0

mmol/L

°

35

-

0.60

0.58

0.30

-

0.25

-

0・20

0.15

-/

°

56

0.54

0.52

0

1O

-

O

5

----------------------------------------

'

0.10

L

------------------------------------------------

0

20

40

60

80

100

0 50

100

150

200

BSA

浓度

/(mg/L)

BSA

浓度

/(mg/L)

(a)

Modified

Lowry

(b)

BCA

0.481

0

50

100

150

BSA

浓度

/(mg/L)

200

(c)

Bradford^

4

含不同浓度

Mg

2

+

BSA

浓度与吸光度的拟合曲线(

=3

)

Fig.

4

Fitting

cuoee

of

BSA

concentration

and

absorbance

with

dideont

concentrations

of

Mg

2

+

(

n

=3)

度相同时,蛋白质浓度越低测试所受干扰越大

Cv

2

+

度和

拟合

,

果见

5

-

大,

5

见,

浓度为

2

mmol/L

对浓度为

25

.

50

.

100

mg/L

BSA

测试造成的

RE

分别为

62.

84%

.

29.

73%

.

15.

96%

-

葡萄糖浓度分别为

1

2

5

mmol/L

Modified

Lowry

拟合

高,

由图

4

(

a

)

可见

Modified

Lowp

法在

Mg

2+

浓度为

1

.

2

.

5

mmol/L

拟合曲线较标准曲线向下偏移较小

导致蛋白质浓度测试值偏高

且测试干扰程度随葡萄

糖浓度增加而增大

葡萄糖浓度相同时

蛋白质浓度

越低

测试所受干扰越大

如葡萄糖浓度为

2

mmol/L

表明

Mg

2

+

Modified

Lowp

法的干扰比

@

2

+

更低

由图

3

(

b

).

3

(

c)

和图

4

(

b

)

4

(

c)

可见

,

BCA

法和

Bodford

法在

Cv

2+

Mg

2+

浓度为

1

2

5

mmol/L

拟合曲线较标准曲线均无明显偏移

表明

Cv

2+

.

Mg2

+

BCA

法和

Bodford

法的测试结果均无明显

BSA

浓度为

25

.

50

.

100

mg/L

的测试造成的

RE

分别为

34.

7%

.

18.

6%

.

9.

8%

-

BCA

法测试受葡萄糖

的干扰与

Modified

Lowry

法类彳

但相同浓度葡萄糖对

BCA

法的测试干扰更显著

如葡萄糖浓度为

2

mmol/L

干扰-

Shen

等&

22

'研究表明

,

Cv

2+

.

Mg

2+

在富含

CO

訂和

OH

Lowp

试剂中易形成

CaCO

s

Mg

(

OH

)

2

沉淀

,

BSA

浓度为

25

.

50

.

100

mg/L

的测试造成的

RE

分别为

79.

4%

.

47.

6%

.

20.

5%

葡萄糖浓度分别为

1

.

2

.

5

mmol/L

,

BoU

(

wd

法的拟合曲线较标准曲线均无

沉淀物在测试波长下发生光散射

使

I

不加

cuso

4

增加,

明显差异,表明葡萄糖对

Bodford

法的测试结果无显

-

葡萄糖对

Modified

Lowp

法和

BCA

法的测试产生

干扰的主要原因是

2

种测试方法中

Cu

+

均起重要作

碱性条件下葡萄糖中的醛基将

Cu

2

+

还原

产生更多

I

蛋白质降低

导致蛋白质定量结果偏低

Cv

2+

Modified

Lowry

法测试干扰比

Mg

2+

更明显,是由于

CaOO

的光散射强度大于

Mg

(

OH

)

2

&

26

7

'

使得不蛋白质更

导致蛋白质定量结果更低

-

BCA

法对

Cv

2+

Mg

2+

具有较好的抗干扰能力

Cu

+

&

28

'

使显色加深

吸光度增加

导致蛋白定量结

果偏高

Bodford

法试剂中不含

Cu

2+

,

因此还原性

因可能是测试试剂中酒石酸钠浓度较高,其可与

Cv

2+

.

Mg2

+

形成络合物

从而降低对蛋白质定量的干扰

;

BCA

糖的存在对

Bodford

法的测试无明显干扰

-

2.3.3

腐殖酸浓度的影响

法样品与测试试剂的体积比更低#

Modified

Lowp

法为

5

8

,

BCA

法为

1

10

)

工作液对样品中的

Cv

2+

Mg

2+

由于

Fplund

等&

15

'提出的

Modified

Lowp

法已对

腐殖酸的干扰做出了修正

该方法可实现对蛋白质和

腐殖酸的同步定量

因此

本研究仅考察腐殖酸浓度

BCA

Beadooed

测试

影响,

果见

6

-

释程度更高

Bodford

法对

Cv

2+

.

Mg

2+

具有较好的抗

干扰能力

原因可能是测试试剂显弱酸性

,

Cv

2+

Mg

2

+

不会形成沉淀干扰测试

-

2.3.2

葡萄糖浓度的影响

6

可见

腐殖酸浓度分别为

10

.

20

.

50

.

100

mg/L

时,

BCA

法和

Bodford

法的拟合曲线较标准曲线向上偏移

采用

Modified

Lowry

BCA

法和

BodCwd

法测定

含不同浓度葡萄糖的

BSA

溶液的吸光度并建立

BSA

大,

高-

BCA

测试

1

杨凯等:活性污泥胞外聚合物中蛋白质定量方法的评价

0

mmol/L

0.001

lx+0.132

0

=0.995

0

O

1

mmol/L

0.001

lx+0.151

0

7?

2

=0.994

0

a

2

mmol/L

j=0.001

lx+0.177

0

7?

2

=0.996

0

5

mmol/L

0.001

lx+0.237

0

7?

2

=0.994

0

0.50

r

-

149

-

0

20

40

60

80

BSA

浓度

/(mg/L)

100

BSA

浓度

/(mg/L)

(b)

BCA

BSA

浓度

/(mg/L)

(c)

Bradford^

(a)

Modified

Lowry

5

含不同浓度葡萄糖时

BSA

浓度与吸光度的拟合曲线(

=3

)

Fig.

5

Fitting

cumes

of

BSA

concentration

and

absorbance

with

digemnt

concentrations

of

glucose

(

%

=3)

0

mg/L

o

10

mg/L

20

mg/L

0.55

-

v50

mg/L

100

mg/L

0.50

0.45

0.001

5x+0.015

0

0.001

5x+0.110

0

0.001

5x+0.114

0

0.001

5x+0.141

0

0.001

5x+0.204

0

=0.999

0

2=0.999 0

2=0.998

0

2=0.999 0

2=0.999 0

0

mg/L

o

10

mg/L

20

mg/L

0.64

-

v

50

mg/L

0.62

-◊100

mg/L

0.000

8x+0.447

0

0.000

8x+0.448

0

0.000

8x+0.450

0

0.000

7x+0.464

0

0.000

6x+0.477

0

Z.994

0

7?

2

=0.998

0

7?

2

=0.997

0

0.994

0

7?

2

=0.995

0

0.60

0.58

0.40

0.35

0.56

0.54

0.52

0.30

0.25

0.50

0.48

0.20

0.15

0.46

0.44

50

°-

1

%

100

150

ESA

浓度

/(mg/L)

(a)

BCA

200

0.42

50

100

150

ESA

浓度

/(mg/L)

(b)

Eraofbrd

200

6

含不同浓度腐殖酸时

BSA

浓度与吸光度的拟合曲线

(

%

=3

)

Fig.

6

Fitting

cumes

of

BSA

concentration

and

absorbance

with

diffemnt

concentrations

of

humic

acid#

%

=3)

结果产生干扰

使测试结果偏高

且随腐殖酸浓度的升

高,干扰程度增强

腐殖酸浓度相同时

蛋白质浓度越

浓度范围内线性相关性好

(

R

2

>0.

99

),

该方法适合

低浓度蛋

质的定量

BCA

法在

10

-

100

.

100

-

2

000

mg

紫浓度范围内具有较好的线性相关性

(

R

2

>0.

99

)

Bradford

20

-

100

.

100

-

1

500

mg/L

低测试所受干扰越大

如腐殖酸浓度为

50

mg/L

时,

BCA

法对浓度为

25

.

50

.

100

mg

紫的

BSA

测试造成的

RE

分别为

93.

3%

.

51.

4%

.

24.

8%

,

Bradford

法分别为

浓度范围内具有良好的线性相关性

(

R

2

0.99

)-

(

2

)

在共有测试

范围

(

20

-

100

mg/

)

内,

Modified

Lowry

法的准确度和精密度均最高,

BCA

72.

8%

.

35.

1%

.

4.

0%

o

腐殖酸浓度由低到高显色为棕色至黑色

BCA

法和

Bradford

法所对应的测试波长下均有一定吸

光度&

29

'

会造成样品吸光度升高

,

从而导致蛋白

质定

o

次之

,

Bradford

法最低

-

(

3

)

Ca

2+

Mg

2+

和葡萄糖干扰

Modified

Lowry

测试,葡萄糖和腐殖酸干扰

BCA

法测试

腐殖酸干

3

结论

(

1

)

3

种方法中蛋白质浓度与吸光度的线性相

Bradford

法测试

°

(

4

)

EPS

中蛋白质定量方法的选择应综合考虑

测试对象的蛋白质浓度

干扰物质种类和测试方法

关性表现:

Modified

Lowry

法在

1

10

.

10

-

100

mg/L

的测试范'

准确度

精密度和抗干扰性

-

150

-

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本文标签: 测试 蛋白质 浓度 方法 定量