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2024年12月29日发(作者：vba教程之ppt篇)
ABTS自由基清除能力检测试剂盒说明书
货号：UPLC-MS-4571
规格：100T/48S
产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称
提取液
试剂一
试剂二
试剂三
试剂四
试剂五
溶液的配制：
规格
液体80mL×1瓶
液体40mL×1瓶
粉剂×1支
液体20μL×1支
液体1.5mL×1支
粉剂×1支
保存条件
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
-20℃保存
2-8℃保存
微量法
1、试剂二：临用前加入1mL蒸馏水，充分溶解；用不完的试剂可分装后保存，-20℃可保存四周，避免反
复冻融；
2、试剂三工作液的配制：液体置于试剂瓶内EP管中。临用前根据样本量按试剂三（μL）：蒸馏水（mL）
=1μL:12mL的比例配成试剂三工作液，现用现配，用多少配多少，尽量在4h之内用完；
3、试剂四工作液的配制：可先将试剂四-20℃分装保存
。
临用前根据样本量按试剂四：试剂一（V:V）=1:9
的比例配成试剂四工作液，现配现用，用不完的试剂放于-20℃可保存两周。
4、试剂五：粉剂置于试剂瓶内玻璃瓶中，含有5mg维生素C，临用前加入2.8mL提取液，充分振荡溶解；
配成10mmol/L维生素C溶液，用于阳性对照。2-8℃可保存两周。
5、ABTS工作液的配制：临用前根据试验所需量按试剂一：试剂二：试剂三工作液（V:V:V）=76:5:4的比例
配成ABTS工作液，现用现配，室温避光保存，务必在30分钟内使用。
产品说明：
ABTS法可用于亲水性和亲脂性物质抗氧化能力测定，是使用最广泛的间接检测方法。ABTS经氧化后生成稳
定的蓝绿色阳离子ABTS自由基，在405nm或734nm处有最大吸收峰。被测物质加入ABTS自由基溶液后，所
含抗氧化成分能与ABTS自由基发生反应而使反应体系褪色，405nm的吸光度下降，在一定范围内其吸光度的变
化与自由基被清除的程度成正比。本试剂盒中，通过测定吸光度下降的程度来反映样本清除ABTS自由基的能力。
ABTS
H
2
O
2
、POD
ABTS·(405nm)
+
Antioxidants
ABTS
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者
增加样本量进行检测。
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！-上海液质检测技术有限公司
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需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、恒温水浴锅、台式离心机、研钵/粉碎机、烘干箱、30~50
目筛、冰、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、植物组织样本的制备：将新鲜样本置于60℃烘箱烘干至恒重，研钵研碎（或粉碎机粉碎），过30~50目筛；
称取约0.05g样本，加入1mL提取液后置于40℃水浴锅中浸提30min；10000rpm室温离心10min，取上清，
置于冰上待测。
2、红酒、果汁等液体样本：吸取100μL样本溶液加入900μL提取液，旋涡振荡混匀，室温10000rpm离心
10min，取上清，置冰上待测。
3、提取物或者药物：可用提取液配制成一定浓度，如5mg/mL。
注意：不同样本清除ABTS自由基的能力可能相差很大，为保证实验结果的准确性，样本要根据预实验结果
进行适当调整（如清除率大于90%，建议将提取的样本用提取液进行稀释；清除率小于5%，建议加大烘干样本
质量或液体样本体积进行提取）。
二、测定步骤
1.
2.
分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至405nm，分光光度计用蒸馏水调零。
阳性对照的准备：若需要线性关系，建议将10mmol/L的维生素C溶液用提取液配制成1、0.8、0.6、0.4、
0.2、0.1mmol/L的维生素C溶液待用，稀释可参考下表；若需要清除率约为90%的阳性对照，则建议将10mmol/L维
生素C溶液用提取液配制成大于1mmol/L的维生素C溶液待用。
序号
1
2
3
4
5
6
3.
稀释前浓度（mmol/L）
10
1
1
1
1
1
维生素C溶液体积（µL）提取液体积（µL）
100
160
120
80
40
20
900
40
80
120
160
180
稀释后浓度（mmol/L）
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0.1
备注：实验中每个标准管需10µL维生素C溶液。
操作表：在96孔板或EP管中分别加入下列试剂：
试剂名称（μL）
上清液
不同浓度的VC溶液
蒸馏水
试剂四工作液
ABTS工作液
试剂一
空白管
-
-
10
20
170
-
测定管
10
-
-
20
170
-
对照管
10
-
-
-
-
190
阳性对照管
-
10
-
20
170
-
充分混匀，室温避光静置6min。测定405nm处的吸光度。分别记为A空白、A测定、A对照、A阳性
对照，阳性对照标准曲线和空白管只需测1-2次。
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！-上海液质检测技术有限公司
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三、ABTS自由基清除率的计算
1.
2.
阳性对照的自由基清除率计算公式：
样本的自由基清除率计算公式：
ABTS自由基清除率D
VC
%=[(A空白-A阳性对照)÷A空白]×100%。
ABTS自由基清除率D%=[A空白-(A测定-A对照)]÷A空白×100%。
注意事项：
1、不同样本清除ABTS自由基的能力可能相差很大，如果要比较不同样本的ABTS自由基清除能力，建议对
于同一批样本加入等量的样本，红酒、组织匀浆、果汁等液体样本加入同样体积，提取物（或者药物）配制成同样
浓度。在比较时，将样本根据预实验结果进行适当调整，比较同样浓度（相同稀释倍数）的清除率大小。
2、样本建议当天提取当天检测。
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