一例白血病患者及家系HLA-B基因全长序列及18个点突变分析

《中国组织工程研究》 Chinese Journal of Tissue Engineering Research

一例白血病患者及家系HLA-B基因全长序列及18个点突变分析

·研究原著·

钟艳平，邹红岩，全湛柔，邓志辉，洪文旭(深圳市血液中心输血医学研究所，广东省深圳市 518020)

DOI:10.3969/.2095-4344.1859 ORCID: 0000-0002-2210-9889(钟艳平)

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文章描述—

(1)HLA

分型技术最早由血清学分型过渡到细胞学，到现在以聚合酶链式反应为基础的高分辨基因分

型技术，准确度和检测效率逐步提高，但仍然存在模棱两可、实验周期长等不足；

(2)近年来逐步发展和成熟的二代测序技术，以高通量和自动化为特征，能够在短时间内同时对上百

亿碱基进行测序，在分子领域具有广阔的应用前景；

(3)采用下一代测序技术对1例白血病患者及家系HLA-B基因的全长序列及18个点突变进行分析。

应用PCR-SSOP及PCR-SBT对1例采集患者父亲、母亲及2位同胞姐妹的

白血病患者进行HLA分型，发现患者血样进行HLA基因测序及遗传学分

的HLA-B结果异常

析，结果发现患者的HLA新等位基因

遗传于其父亲

新等位基因与同源性最接近的等位基

因HLA-B*15:09:01相比，在外显子、

内含子和3’UTR共存在18个碱基突

采用NGS对患者及家系

变。该新基因被WHO HLA因子命名

HLA-B进行全

长测序分析

委员会正式命名为HLA-B*15:435

文题释义：

人类白细胞抗原B(human leucocyte antigen，HLA-B)：HLA-B属于HLA经典一类分子，位于人类6号染色

体短臂，具有高度的基因多态性，其表达的产物分布在几乎所有有核细胞表面，参与抗原提呈和特异性免疫

应答反应。

下一代测序技术：一种以“边合成边测序”为核心思想的高通量测序技术，能够在短时间内同时对上百亿碱

基进行测序。在人类基因组、转录组、肿瘤等研究领域具有巨大的应用价值。

摘要

背景：人类白细胞抗原HLA经过长期进化形成丰富的多态性，近几年由于受检人数增加及HLA分型技术快

速发展，HLA新基因不断被发现。

目的：采用下一代测序技术对1例白血病患者及家系HLA-B基因的全长序列及18个点突变进行分析。

方法：应用序列特异性寡核苷酸探针杂交(PCR-SSOP)及聚合酶链反应-直接测序法(PCR-SBT)发现患者的

HLA-B结果异常。为了鉴定该基因，采用下一代测序技术对该基因全长进行测序，同时采集患者父亲、母亲

及2位同胞姐妹的血样进行HLA基因的遗传学分析。

结果与结论：应用序列特异性寡核苷酸探针杂交及聚合酶链反应-直接测序法均提示该样本HLA-B无完全匹

配的基因型。应用下一代测序技术分析发现，与同源性最高的等位基因B*15:09:01相比，该基因在外显子、

内含子和3′UTR共存在18个碱基突变。5个外显子碱基突变位于第3，4外显子，分别为：第486位G→C、

第583位T→C、第636位T→C、第652位A→G和第756位C→T，导致5个相应密码子发生改变，其中

2个碱基替换为错义突变，第171位酪氨酸(Tyr)→组氨酸(His)、第194位异亮氨酸(Ile)→缬氨酸(Val)。家系

调查显示患者HLA-B新基因来源于父亲。新基因序列已递交给Genbank数据库(MG595995)。应用下一代测

序技术鉴定了1个HLA-B新等位基因，该基因于2017年12月被WHO HLA因子命名委员会正式命名为

HLA-B*15:435。

关键词：

白血病；人类白细胞抗原；新等位基因；下一代测序技术；家系调查；碱基突变；序列特异性寡核苷酸探针

杂交；聚合酶链反应-直接测序法

中图分类号：R459.5；R394；R552

基金资助：

深圳市医疗卫生三名工程项目

(SZSM201811092)

，项目负责人：洪文旭；深圳市卫生计生系统科研项目

(201506076)

，项目负责人：邹红岩

Analysis of full-length sequence and 18 point mutations of HLA-B in a leukemia

patient and her family

Zhong Yanping, Zou Hongyan, Quan Zhanrou, Deng Zhihui, Hong Wenxu (Shenzhen Institute of Transfusion

Medicine, Shenzhen Blood Center, Shenzhen 518020, Guangdong Province, China)

钟艳平，女，1992年生，

广东省梅州市人，汉族，

2015年南方医科大学毕

业，初级检验技师，主要

从事人白细胞抗原组织配

型高分辨确认工作。

通讯作者：邹红岩，主任

技师，深圳市血液中心输

血医学研究所，广东省深

圳市 518020

文献标识码:A

来稿日期：2019-05-08

送审日期：2019-05-16

采用日期：2019-06-12

在线日期：

2019-09-26

Zhong Yanping, Technician,

Shenzhen Institute of

Transfusion Medicine,

Shenzhen Blood Center,

Shenzhen 518020,

Guangdong Province, China

Corresponding author:

Zou Hongyan, Chief

technician, Shenzhen

Institute of Transfusion

Medicine, Shenzhen Blood

Center, Shenzhen 518020,

Guangdong Province, China

77

钟艳平，邹红岩，全湛柔，邓志辉，洪文旭

.

一例白血病患者及家系

HLA-B

基因全长序列及

18

个点突变分析

[J].

中国组织工程研究，

2020

，

24(1):77-82. DOI:10.3969/.2095-4344.1859

Abstract

BACKGROUND: The human leukocyte antigen (HLA) has undergone long-term evolution to form diverse polymorphisms. In recent years,

due to the increase in the number of examinees and the rapid development of HLA typing technology, novel HLA alleles have been

discovered constantly.

OBJECTIVE: To analyze the full-length sequence and 18 point mutations of HLA-B gene in a leukemia patient and her family using the

next-generation sequencing technology.

METHODS: Polymerase chain reaction and sequence-specific oligonucleotide probes (PCR-SSOP) and polymerase chain reaction-sequence

based typing (PCR-SBT) revealed abnormalities in the patient’s HLA-B. To identify the genotype, we sequenced the full length of the gene by

next-generation sequencing technology and collected blood samples from the patient’s father, mother and two sisters for genetic analysis of

HLA genes.

RESULTS AND CONCLUSION: Both PCR-SSOP and PCR-SBT indicated that the HLA-B sample had no perfectly matched genotype.

Further detection using the next-generation sequencing technology revealed that the novel allele had 18 base mutations in the exon, intron

and 3'UTR compared to the most homologous allele B*15:09:01. Five exon base mutations were located in the exons 3 and 4, which were:

486G→C, 583T→C, 636T→C, 652A→G, 756C→T, resulting in changes in the five corresponding codons, including 171 tyrosine (Tyr) →

histidine (His) and 194 isoleucine (Ile) → valine (Val). A pedigree survey found that the patient’s novel HLA B allele was inherited from her

father. The novel allele sequence was submitted to the Genbank database (MG595995). A novel HLA-B allele was confirmed by the

next-generation sequencing, which was officially named HLA-B*15:435 by the World Health Organization HLA Factor Nomenclature

Committee in December 2017.

Key words: leukemia; human leukocyte antigen; novel allele; next-generation sequencing; pedigree survey; base mutation; polymerase chain

reaction and sequence-specific oligonucleotide probes; polymerase chain reaction-sequence based typing

Funding: Sanming Project of Medicine in Shenzhen, No. SZSM201811092 (to HWX); Research Project of Shenzhen Health and Family

Planning System, No. 201506076 (to ZHY)

0 引言 Introduction

人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)是

位于6号染色体短臂上紧密相连的基因簇，与机体的自我识

别和免疫应答密切相关，在长期的进化过程中形成了高度

多态性和不同种族、不同地域独特的分布特征

[1-2]

。自1958

年第1个HLA抗原被发现以来，越来越多的研究表明其在移

植排斥反应、疾病相关性研究和法医学等多个领域均有紧

密关联

[3-5]

。精准的HLA分型结果为器官移植、造血干细胞

移植、疾病相关性研究、亲子鉴定、群体遗传学等提供了

基础数据

[6-7]

。截止到2018年10月为止，已发现的HLA等位

基因有20 088个，其中HLA-B有5 590个等位基因

(/ipd/imgt/hla/stats)。作者所在实验

室应用序列特异性寡核苷酸探针杂交(polymerase chain

reaction and sequence-specific oligonucleotide probes，

PCR-SSOP)和聚合酶链反应-直接测序法(polymerase

chain reaction-sequence based typing，PCR-SBT)对临床

样本HLA分型时发现结果异常，对疑似为新基因的样本采

用基于ION S5

TM

测序系统的下一代测序技术(next

generation sequencing，NGS)进行鉴别，鉴定了一个

HLA-B新等位基因。新的基因序列已提交至Genbank

(MG595995)。该基因于2017年12月被世界卫生组织HLA

因子命名委员会正式命名为HLA-B*15:435，现将该基因的

检测、鉴定、全长序列分析及家系调查报道如下。

广东，汉族。2017年6月到作者所在实验室做造血干细胞

移植前配型时发现HLA-B分型结果异常。在征得知情同意

后，采集其一级家属包括父亲、母亲、同胞姐妹的EDTA

抗凝全血做家系调查分析。

1.4 方法

1.4.1 实验试剂和仪器 核酸提取试剂(批号：

S4101-18005)(中国台湾芮宝公司)；LABType

TM

SSO 流

式磁珠分型试剂(批号：LOT 005)(美国One Lambda公司)；

SeCore

TM

测序试剂盒(批号：LOT 007)(美国One Lambda

公司)；NXType

TM

NGS试剂盒(批号：LOT 002)(美国One

Lambda公司)；全自动核酸提取仪(中国台湾芮宝公司)；

ND 2000型超微量紫外分光光度计(美国Thermo Fisher

Scientific公司)；FLEXMAP-3D型多功能高通量流式荧光点

阵仪(美国One Lambda公司)；3730型序列分析仪(美国ABI

公司)；9700型基因扩增仪(美国ABI公司)；ION S5

TM

测序

仪(美国One Lambda公司)。

1.4.2 基因组DNA制备 按照台湾芮宝magcore

®

的试剂

说明，采用全自动核酸提取仪提取基因组DNA。用超微量

紫外分光光度计(型号：ND2000)检测DNA浓度及纯度，

DNA质量浓度在20-70 mg/L，A

260

/A

280

在1.70-1.90。

1.4.3 PCR-SSOP 采用美国One Lambda公司

LABType SSO试剂对HLA-A、-C、-B、-DRB1、-DQB1 5

个位点进行特异性扩增。在96孔杂交板加入1.5 μL的变性

液与3.0 μL的扩增产物于室温下反应10 min，加入中和液；

将稀释后的磁珠加入至各孔，于60 ℃孵育15 min后加入洗

液洗涤；4 000 r/min离心，甩掉上清液，再加入洗涤液，

重复洗涤3次；加入配好的荧光标记，60 ℃孵育5 min，洗

涤1次后加入缓冲液，转移到上机板后放入Luminex流式磁

珠仪读取，结果用HLA Fusion 4.2软件判读。

1.4.4 PCR-SBT(Sanger测序) 严格按照美国Thermo

1 对象和方法 Subjects and methods

1.1 设计 应用PCR-SSOP、PCR-SBT和NGS联合检测

样本，并进行家系调查。

1.2 时间及地点 于2017年6月在深圳市血液中心输血

医学研究所完成HLA分型检测。

1.3 对象 1名患有急性髓细胞白血病的女性患者，籍贯

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ZHONG YP, ZOU HY, QUAN ZR, DENG ZH, HONG WX. Analysis of full-length sequence and 18 point mutations of HLA-B in a leukemia patient and her family.

Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2020;24(1):77-82. DOI:10.3969/.2095-4344.1859

Fisher Scientific公司SeCore

TM

分型试剂盒说明书对

HLA-A、-C、-B、-DRB1、-DQB1 5个位点进行特异性扩

增，每孔加入4 μL ExoSAP-IT纯化，纯化后的产物进行正

反向测序；测序产物经醋酸乙醇沉淀法纯化后，加入15 μL

甲酰胺，95 ℃变性2 min，在ABI 3730测序仪上进行毛细

管电泳。测序结果导入uTYPE7.2软件。

1.4.5 下一代测序分型(ION S5

TM

测序平台)

(1)DNA扩增和定量：严格按照美国One Lambda公司

NXType

TM

NGS试剂盒的试剂说明特异性扩增HLA Ⅰ类

(A、C、B位点)全长，Ⅱ类(DRB1和DQB1位点)扩增第2，

3外显子。使用AMPure Xp磁珠对扩增产物纯化后，用

Qubit

®

dsDNA HS Assay 试剂盒对产物进行定量。把Ⅰ类

和Ⅱ类产物进行等摩尔混合。

(2)文库构建：应用ION Shear

TM

Plus试剂，把扩增产

物随机片段化，片段两段接上小片段序列接头，筛选300-

1 000 bp目标片段进行2次扩增，纯化后用Agilent 2200

TapeStation最终定量，制备文库。

(3)乳化PCR产物：经过乳化后在40 ℃等温扩增条件

下，将小片段结合在磁珠ISP上进行单克隆扩增，筛选出富

集ISP珠子作为测序模板终产物，加载至Ion 530

TM

Chip芯

片上，在ION S5测序平台上分别加入4种脱氧核苷酸，开

始测序。

(4)数据分析：用TypeStream Visual

TM

NGS Analysis

Software软件进行数据处理和分析。

1.5 主要观察指标 患者及家系成员的HLA流式分型结

果、PCR-SBT分型结果、NGS全长测序结果、核苷酸和氨

基酸序列比对。

第652位和第756位，见图1。

2.3 下一代测序分型技术 NGS对HLA Ⅰ类位点全长进

行测序，发现患者和父亲均携带1个HLA-B新等位基因，新

等位基因序列完全相同。与同源性最高的等位基因

B*15:09:01相比，新等位基因在第3和第4外显子上存在5

个碱基突变，突变点位置分别为第486位G→C、第583位

T→C、第636位T→C、第652位A→G和第756位C→T，与

Sanger法检测的突变点位置一致，见图2。导致了5个相应

密码子发生改变，其中3个属于同义突变，编码氨基酸不发

生改变，分别为第138位苏氨酸(Thr)、第188位组氨酸(His)

和第228位苏氨酸(Thr)；另外2个碱基替换为错义突变，第

171位密码子编码的氨基酸由酪氨酸(Tyr)变为组氨酸

(His)，第194位密码子编码的氨基酸由异亮氨酸(Lle)变为

缬氨酸(Val)。同时，NGS检测出新基因与HLA-B*15:435

相比存在11个内含子及2个3′UTR的碱基突变，其中第3内

含子有3个点突变，第4内含子有2个点突变，第5内含子有

6个点突变。碱基突变位置分别为：第1 211位G→A、第1 215

位G→C、第1 468位C→A、第1 871位G→C、第1 916位

A→G、第2 233位A→G、第2 242位G→A、第2 274位C→T、

第2 377位C→T、第2 414位T→G、第2 449位T→C、第

2 910位G→T、第2 978位C→T。在NGS分析软件上序列

图谱见图3和图4。

2.4 命名 新基因序列已递交给Genbank数据库

(MG595995)，并于2017年12月被WHO HLA因子命名委员

会正式命名为HLA-B*15:435。

图1 患者聚合酶链反应-直接测序法(PCR-SBT)序列图

Figure 1 Polymerase chain reaction-sequence based typing map

of the patient

2 结果 Results

2.1 PCR-SSOP分型结果 将家系中各成员的流式分型

数据导入软件分析，结果见表1。患者和其父亲HLA-B位点

磁珠格局异常，提示736号磁珠假阳性且调整不合理，不

能指定为任意确定的等位基因型。

2.2 PCR-SBT(Sanger测序)分型结果 将序列导入

uTYPE 7.2分析软件发现，患者及其父亲HLA-B位点的测

序结果无完全匹配的基因型。与最接近的B*15:09:01，

B*46:01/B*15:09:01，B*48:01基因型相比，均存在5个碱

基突变点，患者及父亲的碱基突变点位置相同，分别位于

第3外显子的第486位和第583位，第4外显子的第636位、

表1 患者及家系成员的序列特异性寡核苷酸探针杂交(PCR-SSOP)流式分型结果

Table 1 Polymerase chain reaction and sequence-specific oligonucleotide probes typing results of the patient and her family members

关系/位点 HLA-A

02:07,11:01

11:01,33:03

02:07,11:01

11:01,33:03

02:07,33:03

HLA-C

01:02:01G,14:02:01G

07:02:01G,14:02:01G

01:02:01G,07:67

07:02:01G,07:67

01:02:01G,07:02:01G

HLA-B

15:09:01,46:01 FP#736

15:09:01,48:01 FP#736

07:02,46:01

07:02,48:01

46:01,48:01

HLA-DRB1

04:04,09:01

04:04,12:02

01:01,09:01

01:01,12:02

09:01,12:02

HLA-DQB1

03:02:01G,03:03:02G

03:02:01G,03:01:01G

03:03:02G,05:01:01G

03:01:01G,05:01:01G

03:03:02G,03:01:01G

患者

父亲

母亲

姐姐1

姐姐2

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钟艳平，邹红岩，全湛柔，邓志辉，洪文旭

.

一例白血病患者及家系

HLA-B

基因全长序列及

18

个点突变分析

[J].

中国组织工程研究，

2020

，

24(1):77-82. DOI:10.3969/.2095-4344.1859

图2 新等位基因HLA-B*15:435与

HLA-B*15:09:01在第3、4外显子的

序列比对

Figure 2 Sequence alignment of

the novel allele HLA-B*15:435 with

HLA-B*15:09:01 in exons 3 and 4

表2 家系成员HLA单倍型

Table 2 HLA haplotypes of family members

家系成员 单倍型 HLA-A HLA-C HLA-B HLA-DRB1

父亲a 11:01 14:02 15:435 04:04

b 33:03 07:02 48:01 12:02

母亲 c 02:07 01:02 46:01 09:01

d 11:01 07:67 07:02 01:01

患者 a 11:01 14:02 15:435 04:04

c 02:07 01:02 46:01 09:01

姐姐1 b 33:03 07:02 48:01 12:02

d 11:01 07:67 07:02 01:01

姐姐2 b 33:03 07:02 48:01 12:02

c 02:07 01:02 46:01 09:01

表注：家系调查中父亲的单倍型设为a/b，母亲的单倍型设为c/d

80

图3 HLA-B外显子碱基突变

Figure 3 HLA-B exon base mutation

图4 HLA-B内含子碱基突变

Figure 4 HLA-B intron base mutation

2.5 家系调查分析 根据基因测序分型结果分析，患者

HLA-DQB1

03:02

03:01

03:03

05:01

03:02

03:03

03:01

05:01

03:01

03:03

HLA-B*15:435新等位基因遗传于父亲。其母亲及2位同胞

姐妹HLA配型结果均在中国常见及确认的HLA等位基因表

(CWD)中，2位同胞姐妹未遗传父亲含有新等位基因的单倍

型。家系成员的单倍型见表2。

3 讨论 Discussion

HLA-B是HLA经典Ⅰ类抗原，编码的蛋白质产物以糖

蛋白的形式几乎表达于所有有核细胞膜表面，通过呈递自

身或异体抗原给CD8

+

T细胞，在自我识别、调节免疫反应

和对异体移植排斥中发挥重要作用

[8-10]

。HLA-B全长包含7

ZHONG YP, ZOU HY, QUAN ZR, DENG ZH, HONG WX. Analysis of full-length sequence and 18 point mutations of HLA-B in a leukemia patient and her family.

Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2020;24(1):77-82. DOI:10.3969/.2095-4344.1859

个外显子和6个内含子，是目前HLA系统中多态性最复杂的

基因座。目前IPD-IMGT/HLA数据库(3.34版，2018-10)中

HLA-B基因有5 590个等位基因，其中超过60%的等位基因

缺少全长序列。作者发现的新等位基因HLA-B*15:435与同

源性最高的等位基因HLA-B*15:09:01相比，在第3、4外显

子上存在5个碱基差别，分别是第486位G→C、第583位

T→C、第636T位→C、第652位A→G和第756位C→T，5

个突变点均为外显子多态性位点。突变导致了5个相应密码

子发生改变，由于遗传密码子的简并性，其中3个密码子编

码的氨基酸不发生改变，另外2个碱基替换为错义突变，第

171位密码子编码的氨基酸由酪氨酸(Tyr)变为组氨酸

(His)，第194位密码子编码的氨基酸由异亮氨酸(Lle)变为

缬氨酸(Val)。由于HLAⅠ类第2，3外显子分别编码a重链

的a1和a2结构域，而a1和a2共同组成抗原肽结合槽，因此，

第3外显子第171位氨基酸的改变，可能改变抗原肽的结合

能力及TCR识别作用，从而引起不同的免疫应答。应用下

一代测序技术进一步分型发现，该新基因与

HLA-B*15:09:01相比同时存在11个内含子和2个3′UTR非

翻译区的碱基突变，这在以往国内外关于新基因的报道中

是少见的

[11-15]

。有趣的是，HLA-B*15组等位基因内含子区

域同源性较高，而该新基因11个内含子突变碱基与大部分

B*15组的等位基因不同，但是与HLA-B*15:20，

HLA-B*15:228相比，这11个内含子突变位置及碱基变化完

全一致。进一步分析发现，新基因与B*15组HLA-B*15:20，

HLA-B*15:228及其他组的HLA-B*35:01:01:01、

HLA-B*51:01:01:01、HLA-B*53:01:01:01、HLA-B*58:01:

01:01从第3内含子开始到第7外显子区域基因序列完全一

致，但是在其他区域与B15的同源性较高。内含子在过去

被认为不编码基因片段，在临床和科研工作中容易被忽视。

近几年的研究认为，内含子可能影响剪切体的产生，进而

影响HLA分子结构和表达水平

[16]

。最新的研究发现，HLA-B

第4内含子编码微小RNA，这些微小RNA在体外影响多个

转录本的表达，影响各种新陈代谢途径和免疫应答网络

[17-18]

。

该新基因的碱基突变是否引起功能变化，尚有待进一步研

究。

国内外学者的研究表明，HLA-B与疾病有着非常紧密

的联系。HLA-B27经过几十年的研究与临床实践，发现与

强直性脊柱炎有极强的关联性，大于90%的患者携带该基

因

[19-21]

。谢彦昕等

[22]

通过Meta分析，认为HLA-B*37和

HLA-B*46是人类免疫缺陷病毒的易感性基因，而

HLA-B*39恰巧相反，是其保护性基因。EYIOL等

[23]

发现

HLA-B35、HLA-B44等位基因与风湿性心脏病密切相关。

以上文献表明，HLA在多种疾病中扮演重要的角色，准确

分型是研究和临床应用的基础。目前HLA常规分型检测方

法主要是PCR-SSOP和PCR-SBT。PCR-SSOP应用特异

性寡核苷酸探针与扩增后的PCR产物杂交，适合大样本

HLA分型初筛。但PCR-SSOP无法直接反映基因序列，在

阴性和阳性磁珠上的探针荧光强度处于临界值时可能出现

误判

[24-27]

。随着中华骨髓库入库标准逐年提高，

PCR-SSOP由于检测的外显子有限，出现模棱两可的基因

型较多，不能完全满足中华骨髓库志愿者HLA分型入库的

标准。基于3730测序仪的SBT检测方法原始读长可超过

1 000 bp，原始数据的准确率高达99%，是目前HLA分型

的金标准

[28]

。商品化试剂盒HLA Ⅰ类位点一般检测第2，3，

4外显子，DQB1检测第2，3外显子，DRB1检测第2外显子，

模棱两可的基因型需加做其他外显子或PCR-SSP加以鉴

别。此例临床样本在常规PCR-SSOP分型时发现，HLA-B

存在一个假阳性的珠子，无完全匹配的结果，疑似为新基

因，但无法判断基因序列变化。应用PCR-SBT对患者

HLA-B测序，无完全匹配的基因型，与最接近的基因型

B*15:09:01，B*46:01相比，有5个碱基突变，但无法确认

突变的碱基具体位于哪一条染色体。联合NGS全长测序，

证实该HLA-B*15等位基因第3、4外显子存在5个碱基突变，

内含子区域和3′UTR非翻译区共存在13个碱基突变，从而

鉴定了一个HLA-B新等位基因。NGS采用了大规模矩阵结

构的微阵列分析技术，将所有短的单体型DNA片段序列与

数据库参考序列比对，通过拟合计算，拼接成完整的全长

序列。该技术极大地降低了模棱两可的可能，在临床、骨

髓库及科研样本HLA分型的高通量测序中具有较好的应用

前景和实用价值

[29-30]

。

采集患者一级亲属的血样做家系分析发现，患者新基

因来源于其父亲，单倍型为A*11:01-C*14:02-B*15:435-

DRB1*04:04-DQB1*03:02，说明携带新基因的单倍型能稳

定遗传。先证者为南方汉族急性髓细胞白血病患者，女性，

其父亲为南方汉族健康人群。基因突变是否与疾病存在关

联性尚有待研究。作者所在实验室已入库的59 496人份中

华骨髓库南方汉族人群HLA分型数据中均未发现新等位基

因HLA-B*15:435，推断该基因为低频基因。由于无法追溯，

该基因的起源、多态性形成机制、单倍型是否具有紧密连

锁关系等尚且未知，有待进一步的研究。

作者贡献

：通讯作者负责实验设计和审校，第一作者负责实验实

施、成文和审校，第三作者负责资料收集，第四、五作者负责实验评

估。

经费支持

：该文章接受了“深圳市医疗卫生三名工程项目

(SZSM201811092)”“深圳市卫生计生系统科研项目(201506076)”

的资助。所有作者声明，经费支持没有影响文章观点和对研究数据客

观结果的统计分析及其报道。

利益冲突

：文章的全部作者声明，在课题研究和文章撰写过程中

不存在利益冲突。

机构伦理问题

：该研究的实施符合深圳市血液中心伦理委员会的

相关伦理要求。

知情同意问题

：1名患有急性髓细胞白血病的女性患者，征得知

情同意后，采集其一级家属包括父亲、母亲、同胞姐妹的EDTA抗凝

全血做家系调查分析。

写作指南

：该研究遵守国际医学期刊编辑委员会《学术研究实验

与报告和医学期刊编辑与发表的推荐规范》。

81

钟艳平，邹红岩，全湛柔，邓志辉，洪文旭

.

一例白血病患者及家系

HLA-B

基因全长序列及

18

个点突变分析

[J].

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2020

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24(1):77-82. DOI:10.3969/.2095-4344.1859

文章查重

：文章出版前已经过专业反剽窃文献检测系统进行3次

查重。

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文章外审

：文章经小同行外审专家双盲外审，同行评议认为文章

符合期刊发稿宗旨。

文章版权

：文章出版前杂志已与全体作者授权人签署了版权相关

协议。

开放获取声明

：这是一篇开放获取文章，根据《知识共享许可协

议》“署名-非商业性使用-相同方式共享4.0”条款，在合理引用的情

况下，允许他人以非商业性目的基于原文内容编辑、调整和扩展，同

时允许任何用户阅读、下载、拷贝、传递、打印、检索、超级链接该

文献，并为之建立索引，用作软件的输入数据或其它任何合法用途。

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(

上接目次页

2

“社长的话”

)

2. 对动物实验研究文章中涉及伦理学内容的要求：

(1) 伦理要求：文章中需提供批准动物实验的动物伦理委员会机构名称和其批准号，即对动物研究报告结果“方法”部分内容均应描述有这

样的“该方案经XXX大学动物实验伦理委员会批准(批准号：xxx，批准时间：xxx)，实验动物在麻醉下进行所有手术(如有必要应提供安乐死方

法)，并尽一切努力最大限度减少其疼痛、痛苦和死亡。”

(2) 写作要求：医学科研人员在动物实验中需遵循国际实验动物护理和使用指南的建议，即Weatherall(2006)报告和NC3Rs指南。涉及动物

实验研究的文章应遵循ARRIVE写作指南(/arrive-guidelines)，并建议在投稿时提交文章自查清单。

(3) 数据共享要求：本刊对动物实验研究文章中数据表述的要求是，文章中用以得到论文结论的数据及方法需要实行数据共享原则，以便他

人重复验证研究结果。① 在投稿时建议提供原始实验数据或将数据在国际数据库注册获DOI标识码，以便为审稿人审稿和其他读者阅读时提供

参考；② 原始数据中如涉及基因、蛋白质、突变体和疾病内容，需在建议的国际公共数据库注册，并在投稿时提供注册号，本刊建议的国际公

共数据库有Figshare或re3data；③ 原始数据中如有少量的或特殊的数据，可以作为论文附件在投稿时和论文一起上传，论文发表时将以辅文形

式在线出版；④ 如果是从其他渠道获取的开放获取的数据，作者必须明确说明数据来源。

(下转本期117页)

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