211212205_超高效液相色谱-串联质谱法同时测定藤黄药材中5种成分的含

王超等：超高效液相色谱-串联质谱法同时测定藤黄药材中5种成分的含量药品检验

超高效液相色谱-串联质谱法

同时测定藤黄药材中5种成分的含量

王超，郭春梅，程红新，史延通

（辽宁省药品检验检测院，辽宁沈阳110036）

【摘要】目的：采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）法建立同时测定藤黄药材中藤黄酸、转位藤黄酸、藤黄酸B、

异藤黄酸、新藤黄酸5种成分的含量。方法：藤黄药材经75%乙醇水超声提取，以ZORBAXEclipsePlusC18为色谱柱、0.1%甲酸

水-乙腈（30∶70，V/V）为流动相，流速为0.4mL/min，柱温为35℃；质谱采用电喷雾离子（ESI）源、正离子扫描的多反应监测

（MRM）模式进行定量分析。结果：藤黄酸、转位藤黄酸、藤黄酸B、异藤黄酸、新藤黄酸分别在51.00~1020、3.749~74.98、8.675~

173.5、60.00~1200、47.95~959ng/mL（r均大于0.9990）的浓度范围内呈现良好的线性关系。5种成分的平均加样回收率分别为

97.2%、98.1%、97.9%、97.0%、99.3%，RSD分别为2.1%、2.1%、2.3%、1.9%、2.1%。藤黄药材中上述5种成分含量分别为22.98%~

23.63%、1.28%~1.35%、2.78%~2.89%、26.13%~26.54%、22.29%~22.40%。结论：该方法操作简便、准确、可靠，可用于藤黄药材的

多指标成分定量测定。

【关键词】超高效液相色谱-串联质谱法；藤黄；含量测定

【DOI编码】10.3969/.1674-4977.2023.03.033

SimultaneousDeterminationofContents

of5ComponentsinGambogebyUPLC-MS/MS

WANGChao，GUOChunmei，CHENGHongxin，SHIYantong

（LiaoningInstituteforDrugControl，LiaoningShenyang110036，China）

Abstract：Objective：Toestablishanultrahighperformanceliquidchromatography-tandemmassspectrometry（UPLC-MS/MS）

methodforthesimultaneousdeterminationofGambogicacid，Gambogellicacid，Morellicacid，IsogambogicacidandGambogenicacid

s：Gambogewasextractedbyultrasonicextractionwith75%erminationwasperformedon

ZORBAXEclipsePlusC18columnwithmobilephaseconsistedof0.1%formicacidsolution-acetonitrile（30∶70，V/V）attheflowrate

of0.4mL/umntemperaturewas35℃.Forquantitation，theelectrosprayionization（ESI）sourcewasappliedtocarryout

thepositiveionscanningwithmultiplereactionmonitoring（MRM）s：ThelinearrangeofGambogicacid，Gambogellic

acid，Morellicacid，IsogambogicacidandGambogenicacidwere51.00~1020、3.749~74.98、8.675~173.5、60.00~1200、47.95~959ng/

mL（allr≥0.9990）respectively，ragerecoverieswere

97.2%，98.1%，97.9%，97.0%，99.3%，andRSDswere2.1%，2.1%，2.3%，1.9%，2.1%，tentoftheabovefive

componentswere22.98%~23.63%、1.28%~1.35%、2.78%~2.89%、26.13%~26.54%、22.29%~22.40%，sion：The

methodissimple，accurateandreliable，whichcouldbeusedasthequantitativedeterminationofmultipleindexcomponentsof

Gamboge.

Keywords：UPLC-MS/MS；gamboge；contentdetermination

藤黄为藤黄科藤黄属植物藤黄GarciniahanburyiHook.

[2]

f.的树脂

[1]

，最早出自《海药本草》，现收录于《中药大辞典》。

用

[3-7]

，藤黄酸和新藤黄酸等成分是藤黄的主要成分

[8-9]

。目前，

关于藤黄含量测定的研究文献报道较少

[10-11]

，因此有必要建立

一种藤黄中多组分的同时含量测定方法。药理学研究表明，藤黄具有抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗病毒等作

Copyright©博看网. All Rights Reserved.

-99-

品牌与标准化

2023年第3期

UPLC-MS/MS（超高效液相色谱-串联质谱）法是以超高

效液相作为分离系统、质谱作为检测系统的分析技术，该分析

技术将超高效液相高分离度的优势与质谱高灵敏度的特性相

结合，具备分离能力强，分析时间短，灵敏度高，专属性强等优

点，广泛应用于中药材的定性定量分析。本研究基于UPLC-

MS/MS技术建立了同时测定藤黄中藤黄酸、转位藤黄酸、藤

黄酸B、异藤黄酸、新藤黄酸5种成分含量的方法，以期为藤黄

药材质量控制及应用提供参考依据。

究院；转位藤黄酸（批号10594）来自上海诗丹德标准技术服务

有限公司；藤黄酸B（批号J15GB150695）来自上海源叶生物

科技有限公司；异藤黄酸（批号CFS202001）、新藤黄酸（批号

CFS202002）来自武汉天植生物技术有限公司；藤黄对照药材

（编号S-01~S-05，批号121215-200602）来自中国食品药品检

定研究院；色谱纯甲醇、色谱纯乙腈、色谱纯乙醇（德国Merck

公司）；质谱级甲酸（美国Sigma公司）。

1.3方法

1材料与方法

1.1仪器

超高效液相色谱仪串联三重四级杆质谱联用仪（Xevo

TQ，美国Waters公司）；电子天平（XP26，瑞士METTLER

TOLEDO公司）；超纯水仪（Milli-QAdvantageA10，美国

Millipore公司）；超声清洗器（AS3120A，天津奥特赛恩斯仪器

有限公司）。

1.2材料

藤黄酸（批号111966-201401）来自中国食品药品检定研

表1

成分

藤黄酸

转位藤黄酸

藤黄酸B

异藤黄酸

新藤黄酸

保留时间/min

16.5

12.2

4.8

17.5

9.6

锥孔电压/V

30

30

18

30

30

1.3.1色谱条件

色谱柱为ZORBAXEclipsePlusC18柱（2.1×100mm1.8-

Micron）；流动相为0.1%甲酸水-乙腈（30∶70，V/V）；流速为

0.4mL/min；柱温为35℃；进样量为2μL。

1.3.2质谱条件

离子源为电喷雾离子（ESI）源，正离子扫描，多反应监测

（MRM）模式；毛细管电压为3.0kV；脱溶剂温度为550℃；锥

孔气流速为50L/Hr；脱溶剂气流速为850L/Hr；碰撞气流速为

0.15mL/min；碰撞气为氩气；其他参数见表1。

藤黄中5种成分的其他质谱参数

定量离子对m/z

629.5→573.4

629.5→573.4

561.5→505.3

629.5→573.4

631.5→507.3

碰撞能量/eV

14

14

12

14

22

定性离子对m/z

629.5→527.4

629.5→527.4

561.5→477.3

629.5→527.4

631.5→479.3

碰撞能量/eV

26

26

22

26

26

1.3.3对照品储备液的制备

精密称取藤黄酸、转位藤黄酸、藤黄酸B、异藤黄酸、新藤

2

2.1

结果与分析

色谱-质谱条件的优化

通过全扫描模式确定母离子并对锥孔电压进行优化，通

黄酸对照品适量，分别置于10mL量瓶中，加甲醇适量，超声

溶解后，加甲醇定容，配制成质量浓度分别为藤黄酸510.0μg/

mL、转位藤黄酸499.9μg/mL、藤黄酸B399.9μg/mL、异藤黄

酸479.4μg/mL、新藤黄酸433.7μg/mL的对照品储备液。精

密吸取上述各单一对照品储备液适量，加甲醇配制为上述成

分质量浓度依次为10.20、0.7498、12.00、0.959、1.735μg/mL的

混合对照品储备液。

1.3.4供试品溶液的制备

取藤黄药材约5mg，精密称定，置于50mL量瓶中，加

75%乙醇水80mL，浸泡5min，超声处理10min，放冷至室温，

用75%乙醇水定容，摇匀，经0.22μm滤膜过滤，取续滤液0.5

mL，置于50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试

品溶液。

过不断增加碰撞能量确定合适的子离子，最终确定5种成分

各自的定量、定性离子对。由于待测成分复杂且成分中具有

极性相近的同分异构体，因此比较了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-

甲酸溶液、乙腈-乙酸铵溶液等多种流动相系统，结果发现，在

流动相中加入适量的甲酸可以使同分异构体达到基线分离，

因此选择乙腈-甲酸溶液作为流动相。各化合物在正、负离子

模式下均有响应，但当流动相系统中加入甲酸后，负离子模式

响应明显降低，因此选择在正离子模式下进行检测。

2.2样品前处理条件的选择

考察了甲醇、乙醇、乙腈三种不同提取溶剂及25%、50%、

75%、100%四种不同溶剂质量分数藤黄中各成分含量的影

-100-

Copyright©博看网. All Rights Reserved.

王超等：超高效液相色谱-串联质谱法同时测定藤黄药材中5种成分的含量药品检验

响，结果显示，不同提取溶剂对提取效率的影响不大，当以

75%乙醇作为提取溶剂时提取效果相对较好，因此选择75%

乙醇作为提取溶剂。比较直接超声处理和浸泡后超声处理两

种不同超声提取方法，结果显示，在相同提取时间下，浸泡后

超声提取液的含量高于直接超声提取液，最终选用浸泡后超

声提取法。比较浸泡5、10、15min和超声10、15、20、30min的

结果，发现延长浸泡时间和提取时间对各成分的含量无显著

影响，最终选择浸泡5min后超声提取10min。

2.3

2.3.1

方法学考察

专属性

分别取空白溶剂、混合对照品溶液和供试品溶液适量，按

照上述条件进样测定，色谱图见图1。由图1可知，待测成分

的分离良好，空白无杂质峰干扰，表明本方法专属性较强。

2.3.2线性关系

分别精密吸取混合对照品储备液0.05、0.1、0.2、0.5、1.0

mL，置于10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成系列质量浓

度的对照品溶液，按照上述条件进样测定，以各成分的质量浓

度（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线并进行回

归分析，得各组分的回归方程和线性范围，结果见表2，表明藤

黄中各成分在相应的浓度范围内均呈现良好的线性关系。

A

图1

表2

成分

藤黄酸

转位藤黄酸

藤黄酸B

异藤黄酸

新藤黄酸

B

注：1.藤黄酸B；2.新藤黄酸；3.转位藤黄酸；4.藤黄酸；5.异藤黄酸。

C

空白溶剂（A）、藤黄混合对照品（B）和供试品（C）的总离子流图

酸、藤黄酸B、异藤黄酸、新藤黄酸的含量分别为23.31%、

1.28%、2.88%、26.18%、22.08%，RSD分别为1.8%、2.8%、

2.9%、1.8%、1.9%，表明方法重复性良好。

2.3.5定性试验

称取藤黄药材粉末约5mg，按上述操作制备供试品溶液，

放置在4℃恒温进样器中，分别于制备后0、2、4、8、12、24h进

样测定，结果显示藤黄酸、转位藤黄酸、藤黄酸B、异藤黄酸、

新藤黄酸峰面积的RSD分别为1.9%、2.9%、2.8%、2.0%、

3.0%，表明供试品溶液在4℃恒温进样器中放置24h内稳定。

2.3.6加样回收试验

取同一藤黄药材约2.5mg，精密称定，平行称取9份，分别

精密加入混合对照品溶液，使加入各成分含量分别为供试品

中相应成分含量的50%、100%、150%，按上述操作制备供试品

溶液，进样测定，计算加样回收率，结果见表3，藤黄中5种成

分的平均回收率为95.1%~101.6%，表明该方法准确度良好。

藤黄中5种成分的回归方程、线性范围和相关系数

回归方程线性范围（/ng/mL）

51.00~1020

3.749~74.98

8.675~173.5

60.00~1200

47.95~959

r

0.9998

0.9991

0.9997

0.9998

0.9998

Y=42.81X-583.5

Y=103.9X-55.70

Y=88.89X-178.4

Y=26.98X-463.6

Y=45.19X-664.7

2.3.3精密度试验

取混合对照品溶液，按照上述条件连续进样测定6次，计

算5种成分峰面积的RSD值，结果显示，藤黄酸、转位藤黄酸、

藤黄酸B、异藤黄酸、新藤黄酸的RSD分别为1.7%、1.8%、

2.2%、1.8%、2.6%，表明仪器精密度良好。

2.3.4重复性试验

称取藤黄药材粉末约5mg，精密称定，平行称取6份，按

上述操作制备供试品溶液，进样测定，计算藤黄酸、转位藤黄

Copyright©博看网. All Rights Reserved.

-101-

品牌与标准化

2023年第3期

表3藤黄中5种成分加样回收率试验结果（n=9）

成

分

原有量加入量测得量

（

m

/mg）（

m

/mg）（

m

/mg）

0.5822

0.6323

0.5994

0.6092

0.6285

0.6318

0.5689

0.5847

0.6167

0.03198

0.03473

0.03293

0.03347

0.03453

0.03471

0.03125

0.03212

0.03388

0.07203

0.07823

0.07417

0.07538

0.07777

0.07817

0.07039

0.07235

0.07630

0.6541

0.7104

0.6735

0.6845

0.7062

0.7099

0.6392

0.6570

0.6928

0.5517

0.5991

0.5680

0.5773

0.5956

0.5987

0.5391

0.5541

0.5843

0.2550

0.2550

0.2550

0.5100

0.5100

0.5100

0.7650

0.7650

0.7650

0.0187

0.0187

0.0187

0.0375

0.0375

0.0375

0.0562

0.0562

0.0562

0.0434

0.0434

0.0434

0.0867

0.0867

0.0867

0.1301

0.1301

0.1301

0.3000

0.3000

0.3000

0.5999

0.5999

0.5999

0.8999

0.8999

0.8999

0.2397

0.2397

0.2397

0.4794

0.4794

0.4794

0.7191

0.7191

0.7191

0.8355

0.8775

0.8565

1.113

1.127

1.125

1.301

1.313

1.344

0.05055

0.05270

0.05195

0.06940

0.07145

0.07075

0.08720

0.08670

0.08970

0.1161

0.1202

0.1161

0.1583

0.1630

0.1643

0.2015

0.1977

0.2015

0.9510

0.9990

0.9590

1.278

1.284

1.290

1.537

1.513

1.555

0.7800

0.8400

0.8060

1.054

1.072

1.063

1.270

1.283

1.306

回收率

（%）

99.3

96.2

100.8

98.7

97.7

96.6

95.6

95.2

95.1

99.1

95.8

101.5

95.8

98.5

96.1

99.5

97.0

99.3

101.6

96.7

96.6

95.6

98.2

99.2

100.7

96.3

96.2

99.0

96.2

95.2

98.9

96.2

96.7

99.8

95.1

95.8

95.3

100.5

99.3

99.4

99.4

96.8

101.6

101.4

100.4

平均回

收率

（%）

RSD

（%）

【参考文献】

[1]

[2]

郑赵情，张莉，沈凯凯，等.藤黄的研究进展[J].世界中医

药，2016，11（7）：1180-1188.

南京中医药大学.中药大辞典（下册）[M].第2版.上海：

上海科学技术出版社，2006.

[3]

[4]

张莉，蔡双璠，孔思远，等.中国藤黄属植物的药理作用

研究进展[J].世界中医药，2016，1（7）：1189-1194.

战鹤，韩璐，何忠梅，等.藤黄有效成分的纳米囊制备及

其抗糖尿病活性评价[J].中国药房，2022，33（9）：1075-

1081.

[5]HATAMIE，JAGGIM，CHAUHANSC，ic

acid:ashiningnaturalcompoundtonanomedicinefor

cancertherapeutics[J].BiochimicaetBiophysicaActa

（BBA）-ReviewsonCancer，2020，1874（1）：188381.

[6]LiuY，ChenY，LinL，icAcidasaCandidate

forCancerTherapy：AReview[J].InternationalJournalof

Nanomedicine，2020，Volume15：10385-10399.

[7]李丽梅，周俊，娄洁，等.大苞藤黄中的一个新黄酮及其

抗烟草花叶病毒活性[J].中国中药杂志，2015，21（4）：

4205-4207.

[8]周安，李庆林，彭代银，等.高效液相色谱-质谱联用法鉴

定中药藤黄中桥环类化合物[J].药学学报，2008（8）：838-

842.

藤

黄

酸

97.22.08

转

位

藤

黄

酸

98.12.01

藤

黄

酸

B

97.92.22

异

藤

黄

酸

97.01.84

新

藤

黄

酸

99.32.09

[9]杨虹，丛晓东，王峥涛.药用藤黄化学成分的研究[J].中

国药学杂志，2008，43（12）：900-902.

[10]赵梦中，成志平，马静，等.HPLC法测定藤黄药材中藤黄

酸的含量[J].中国民族医药杂志，2020，26（1）：32-34.

[11]林青华，林宏英，魏雅蕾，等.高效液相色谱法测定藤黄

药材中藤黄酸与新藤黄酸的含量[J].现代中药研究与实

践，2014，28（6）：25-28.

2.4样品含量测定

精密称取编号为S-01~S-04的藤黄药材粉末约0.5mg，

按上述操作制备供试品溶液，进样测定，采用外标法计算样品

中各成分的含量，结果见表4。

表4

成分

藤黄酸

转位藤黄酸

藤黄酸B

异藤黄酸

新藤黄酸

样品含量测定结果（n=4）

S-01

23.63

1.28

2.89

26.41

22.29

不同编号含量/%

S-02S-03

23.1823.21

1.351.32

2.782.82

26.5426.13

22.3122.36

S-04

22.98

1.35

2.79

26.20

22.40

【作者简介】

王超，女，1985年出生，副主任药师，研究方向为药品非法添加

及化妆品理化检验。

郭春梅，女，1966年出生，高级工程师，研究方向为食品、化妆

品检验。

程红新，女，1966年出生，高级工程师，研究方向为食品、化妆

品检验。

史延通，男，1975年出生，正高级研究员，研究方向为化妆品业

务管理。

（编辑：侯睿琪）

3结论

本研究建立了一种同时测定藤黄药材中5种成分含量的

UPLC-MS/MS方法。该法快速、简便、准确度高，可为藤黄药

材质量控制及应用提供参考依据可为藤黄药材的质量控制提

供依据。

-102-

Copyright©博看网. All Rights Reserved.