瘢痕疙瘩及增生性瘢痕中MMP-2、MMP-9的表达

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第１６卷第ｌ期　

２００７年２月　

中国组织化学与细胞　

化学杂志　

ＡＮＤ　ＣＹＴＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ　

ＣＨＩＮＥＳＥ。ＩＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＨＩＳＴＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ　

ＶＯｌ＿ｌ６．ＮＯ．１　

Ｆｅｂ．２００７　

瘢痕疙瘩及增生性瘢痕中ＭＭＰ一２、ＭＭＰ一９的表达　

许　静　狄正鸿　周　卓　崔　乐　

（中国医科大学附属二院皮肤科，　中心实验室，沈阳　１１０００４）　

［摘要］　目的探讨基质金属蛋白酶一２、基质金属蛋白酶一９（ＭＭＰ－２、ＭＭＰ＿９）在瘢痕疙瘩（ｋｅｌｏｉｄ，Ｋｅ）及增生　

性瘢痕中（ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ　ｓｃａｒ，ＨＳ）的表达。方法免疫组织化学ｓＰ法检测ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９在２Ｏ例瘢痕疙瘩、１５例增　

生性瘢痕及１Ｏ例正常皮肤中的表达，采用图像分析技术对免疫组化结果进行定量分析。结果Ｋｅ中ＭＭＰ－２表达高于正　

常皮肤（￡一２．３６６，Ｐ＜０．０５），高于ＨＳ（￡一２．２２３，Ｐ＜０．０５）；ＭＭＰ－９表达高于正常皮肤（￡一３．１９８，Ｐ＜０．０１），高　

于ＨＳ（￡一２．１１０，Ｐ＜０．０５）。ＨＳ中ＭＭＰ－２表达与正常皮肤无差异（￡一０．２１８，Ｐ＞Ｏ．０５），ＭＭＰ＿９表达与正常皮肤无　

差异（￡一１．８７３，Ｐ＞Ｏ．０５）。正常人皮肤仅见ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９蛋白的弱阳性或阴性表达。结论ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９蛋白　

的表达与皮肤损伤后的过度增殖及肿瘤化倾向有关。　

［关键词］　瘢痕疙瘩；　增生性瘢痕；　基质金属蛋白酶　

［中图分类号］　Ｒ３２２．９９　［文献标识码］　Ａ　

ＥＸＰ］ＲＥＳＳＩＯＮＳ　ＯＦ　ＭＡＴＲＩＸ　ＭＥＴＡＬＬｏＰＲｏＴＥＩＮＡｓ＿２　ＡＮＤⅣ　ＴＲＩＸ　ＭＥＴＡＬＬｏＰＲｏＴＥＩＮＡｓ＿９　

ＩＮ　ＫＥＬＯＩＤ　ＡＮＤ　ＨＹＰＥＲＴＲＯＰＨＩＣ　ＳＣＡＲ　

Ｘｕ　Ｊｉｎｇ　，Ｄｉ　Ｚｈｅｎｇｈｏｎｇ，Ｚｈｏｕ　Ｚｈｕｏ　，Ｃｕｉ　Ｉｒｅ　

（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ；　Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｌａｂｏｒｅｔｏｒｙ，Ｔｈｅ　Ｓｅｃｏｎｄ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，　

Ｃｈｉｎａ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ　１　１０００４，Ｃｈｉｎａ）　

［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｍａｔｒｉｘ　ｍｅｔａｌｌｏＤｒｏｔｅｉｎａｓ一２　ａｎｄ　ｍａｔｒｉｘ　ｍｅｔａｌ—　

ｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓ－９（ＭＭＰ一２，ＭＭＰ－９）　ｉｎ　ｋｅｌｏｉｄ　ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ　ｓｃａｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ＭＭＰ－２　ａｎｄ　

ＭＭＰ－９　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｖ　ＳＰ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃｃａｌ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｉｎ　２０　ｋｅｌｏｉｄ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ａｎｄ　１　５　ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ　

ｓｃａｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＭＭＰ－２　ｉｎ　ｋｅｌｏｉｄ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｓｋｉｎ　

（￡一２．３６６，Ｐ＜０．０５）ａｎｄ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ　ｓｃａｒ（￡一２．２２３，Ｐ＜０．０５），ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＭＭｐ－　

９　ｉｎ　ｋｅｌｏｉｄ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｓｋｉｎ　０＝３．１９８，Ｐ＜Ｏ．０１）ａｎｄ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈ—　

ｉｃ　Ｓｃａｒ（￡一２．１１０，Ｐ＜Ｏ．０５）．ＭＭＰ－２　ａｎｄ　ＭＭＰ一９　ｗｅｒｅ　ｓｔａｉｎｅｄ　ｓｌｉｇｈｔｌｙ　ｏｒ　ｂａｓｉｃａｌｌｙ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｉｎ　ｈｙｐｅｒ－　

ｔｒｏｐｈｉｃ　ｓｃａｒ　ａｎｄ　ｎｏｒｍａｌ　ｓｋｉｎ．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＭＭＰ－２　ｉｎ　ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ　ｓｃａｒ　ｈａｄ　ｎｏ　ｄｉｆｆｒｅｒａｎｃｅ　ｆｒｏｍ　ｔｈａｔ　

ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｓｋｉｎ（ｔ一０．２１８，Ｐ＞０．０５），ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＭＭＰ－９　ｉｎ　ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ　ｓｃａｒ　ｈａｓ　ｎｏ　ｄｉｆｆｒ—　

ｅｒａｎｃｅ　ｆｒｏｍ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｓｋｉｎ（￡一１．８７３，Ｐ＞０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　ＭＭＰ＿２　ａｎｄ　ＭＭＰ－９　ｍａｙ　ｒｅｌａｔｅ　ｔｏ　ｔｈｅ　

ｅｘｃｅｓｓｉｖｅ　ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ　ｃｈａｎｇｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ　ｔｏ　ｔｕｍｏｒ　ａｆｔｅｒ　ｄａｍａｇｅ．　

［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ３　Ｋｅｌｏｉｄ；Ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ　ｓｃａｒ；　Ｍａｔｒｉ　ｘ　ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓ　

皮肤创伤后创面愈合会产生不同的结局，包括　ｐｌａｓｉａ，ＰＥＨ）。Ｋｅ，ＨＳ属于病理性瘢痕。细胞外　

正常瘢痕（ｓｃａｒ），增生性瘢痕（ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ　

基质代谢及重塑是创伤愈合过程中的关键环节，依　

ｓｃａｒ，ＨＳ），瘢痕疙瘩（ｋｅｌｏｉｄ，Ｋｅ），慢性溃疡及　

赖于蛋白降解酶的表达和激活。基质金属蛋白酶　

假性上皮瘤样增生（ｐｓｅｕｄｏｅｐｉｔｈｅｌｉｏｍａｔｏｕｓ　ｈｙｐｅｒ一　

（ｍａｔｒｉｘ　ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ，ＭＭＰｓ）是一组重要的　

细胞外基质降解酶Ⅲ。为探讨基质金属蛋白　

酶一２、　

［收稿日期］２００６—０４—１０　［修回日期］２００６—１２—１０　

基质金属蛋白酶一９（ＭＭＰ一２、ＭＭＰ－９）在　

Ｋｅ及　

［基金项目］辽宁省自然科学基金（２００６２００８６）　

ＨＳ中的表达，采用免疫组织化学ＳＰ法对ＭＭＰ－２　

［作者简介］许静，女（１９６４年），汉族，副教授。　

、

ＭＭＰ－９在２０例瘢痕疙瘩，１５例增生性瘢痕及　

＊通讯作者（Ｔｏ　ｗｈｏｍ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ　ｓｈｏｕｌｄ　ｂｅ　ａｄｄｒｅｓｓｅｄ）　

１０例正常皮肤中的表达进行研究。　

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中国组织化学与细胞化学杂志　第１６卷　

材料和方法　

１．病例及对照　

体的工作浓度为１：１００）；ＤＡＢ显色，苏木素复　

染，加拿大树胶封片。阴性对照：用ＰＢＳ　

（Ｏ．０１ｎｌｏｌ／Ｉ　，ｐＨ７．４）缓冲液替代一抗。已知阳性　

片作阳性对照。　

选择我院１９９９—２００３年间皮肤科及外科手术　

切除的病理学证实瘢痕疙瘩及增生性瘢痕皮肤石蜡　

标本．其中Ｋｅ　２０例，平均年龄３５．６岁，男９例，　

女１１例，ＨＳ　ｌ５例，平均年龄３１．４岁，男５例，　

２．３结果判定标准及计数方法　以棕黄色颗　

粒在胞浆的沉积为阳性结果，采用美国ＵＩＣ公司　

Ｍｅｔａｍｏｒｐｈ　Ｉｍａｇｉｎｇ　Ｓｙｓｔｅｍ　Ｖ４．６软件包进行灰度　

分析［２］　在４Ｏ　ｘ　３．３放大倍数下随机测定５个视　

野，取平均值，灰度值用　±Ｓ表示。　

２．４统计学处理ＳＰＳＳ１４．０软件包进行ｔ检　

验。　

结　果　

女ｌＯ例。１Ｏ例正常皮肤来自我院创伤外科患者躯　

干皮肤，平均年龄３８．２岁。　

２．实验方法　

２．１　主要实验试剂兔抗人ＭＭＰ一２、ＭＭＰ－　

９多克隆抗体（博士德生物工程有限公司），ＳｐＴＭ　

Ｋｉｔ（美国Ｚｙｍｅｄ公司）。　

２．２方法　

１．Ｋｅ与正常皮肤及ＨＳ患者相比，ＭＭＰ＿２　

呈高表达，Ｐ值均小于０．０５（表）。　

２．Ｋｅ与正常皮肤及ＨＳ患者相比，ＭＭＰ＿９　

呈高表达，Ｐ值分别小于０．０１及０．０５。　

３．ＨＳ与正常人皮肤相比，ＭＭＰＬ２、ＭＭＰ－９　

蛋白表达无明显差异，Ｐ值均大于０．０５。　

免疫组织化学方法石蜡切片常规脱蜡至水；　

３　过氧化氢于室温下灭活内源性过氧化物酶１Ｏ分　

钟；ＥＤＴＡ（］ｍｍｏｌ／Ｉ　ｐＨ８．Ｏ）在９７℃一１００℃下　

微波修复１Ｏ分钟，室温下自然冷却；以后操作按　

ＳＰ　Ｋｉｔ说明进行（ＭＭＰＬ２、ＭＭＰ－９多克隆抗　

表ｌ　ＭＭＰ－２和ＭＭＰ－９在Ｋｅ及ＨＳ中的表达（灰度值）（　±　

Ｔａｂｌｅ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ＭＭＰ－２　ａｎｄ　ＭＭＰ一９　ｉｎ　ｋｅｌｏｉｄ　ａｎｄ　ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ　ｓｃａｒ（Ｇｒａｙ　ｖａｌｕｅ）（　士ｓ）　

￡（Ｋｅ／ＮＳ）－－２．３６６，Ｐ＜Ｏ．０５　

￡（Ｈｓ／ＮＳ）一Ｏ．２１８，Ｐ＞Ｏ．０５　

￡（Ｋｅ／ＨＳ）＝２．２２３，Ｐ＜Ｏ．０５　

￡（Ｋｅ／ＮＳ）：３．１９８，Ｐ＜Ｏ．０１　

￡（ＨＳ／ＮＳ）一１．８７３，Ｐ＞Ｏ．０５　

ｔ（Ｋｅ／ＨＳ）＝２．１１０，Ｐ＜０．０５　

讨　论　

细胞外基质代谢及重塑是创伤愈合过程中的关　

键环节，瘢痕疙瘩成纤维细胞同正常皮肤成纤维细　

病理性瘢痕存在两种情况，即Ｋｅ与ＨＳ，为　

皮肤损伤修复过程中组织过度增生所致，组织学上　

均以成纤维细胞的过度增生和细胞外基质，尤其胶　

胞在形态上没有明显差异，但功能上可能存在缺　

陷，离体时可继续产生高水平的胶原、纤维粘连蛋　

白、弹性蛋白、蛋白多糖等细胞外基质使细胞外基　

原过度沉积，以及细胞外基质降解不足为特征，组　

织病理学上不易鉴别。临床上，典型的Ｋｅ与ＨＳ　

的不同点在于瘢痕疙瘩超过皮损边缘呈浸润性过度　

质的分解低于合成，Ｉ、Ⅲ型胶原蛋白组成及合成　

量的改变将导致其生物学行为的异常［３　］。而瘢　

痕与正常皮肤相比，其成纤维细胞胶原酶ｍＲＮＡ　

生长，超过原伤Ｈ界限，无自限性，呈瘤样增生，　

单纯手术切除后易复发，必须辅以电子束照射等综　

合治疗，有良性真皮肿瘤之称。而对于非典型的　

的水平及酶的活性较正常皮肤明显下降［６］。不同来　

源的成纤维细胞具有不同的表型，其表型的不同主　

要表现在对细胞因子反应性的不同，从而表现出不　

Ｋｅ与ＨＳ的临床鉴别诊断仍存在困难，目前尚无　

种可用于鉴别两者的金标准，从而给病理性瘢痕　

一

同的生物学活性，所以有学者提出了成纤维细胞的　

异质性学说Ｉ＿７］。　

的诊断治疗带来困难。　

基质合成与降解之间的平衡对组织修复结果起　

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７０　中国组织化学与细胞化学杂志　

医学工程杂志，１９９３，１０：２８１—２８１　

第１６卷　

了重要作用，细胞外基质蛋白水解是组织修复和重　

建中最具特征的过程，ＭＭＰｓ是细胞外基质降解酶　

［３］ＳａｔＯ　Ｍ，Ｉｓｈｉｋａｗａ　Ｏ，Ｍｉｙａｃｈｉ　Ｙ．Ｄｉｓｔｉｎｃｔ　Ｐａｔｔｅｒｎｓ　ｏｆ　

的重要组成部分，其中ＭＭＦＬ２、ＭＭＰ一９是胶原及　

基质降解的关键酶，其作用底物主要是Ⅳ型胶原和　

明胶，还可降解Ⅶ型、Ⅸ、Ｘ型胶原。众多的研究　

表明ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９在各种恶性肿瘤中呈高度表　

达状态，且与肿瘤的转移侵袭能力有关＿＿８．９］。我们　

的研究发现Ｋｅ成纤维细胞中ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９表　

达高于正常皮肤及ＨＳ，ＨＳ成纤维细胞中ＭＭＰ－２　

、

ＭＭＰ－９表达与正常皮肤无差异，未见有类似的　

相关文献报道。表明ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９蛋白在成纤　

维细胞中的表达与皮肤损伤后的过度增生及肿瘤化　

倾向有关，可望成为病理学上鉴别两者的有力证　

据，也进一步印证了Ｋｅ中成纤维细胞的异质性学　

说。但关于ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９蛋白的表达是如何参　

与损伤后组织修复转归方向的具体机制有待于进一　

步深入研究。关于ＭＭＰｓ的研究目前在国内外处　

于极其活跃的状态，通过阻断ＭＭＰ－２、ＭＭＰ一９的　

作用有望达到控制和治疗多种肿瘤的目的，而Ｋｅ　

中ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９高度表达，不仅在Ｋｅ与ＨＳ　

的鉴别诊断中具有极其重要的参考价值，其在治疗　

Ｋｅ的药用前景中的价值亦相当令人鼓舞。　

参考文献　

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ａｓｅｓ－２　ａｎｄ　９　ｉｎ　ｃｕｔａｎｅｏｕｓ　ｂａｓａ１　ａｎｄ　ｓｑｕａｍｏｕｓ　ｃｅｌ１　ｃａｒｃ￣　

ｎｏｍａ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，１９９９，１９：２９２９—２９３８　

（９３　Ｐ）ｒｋｅ，Ｃ，Ｒａ１ｆｋｉａｅｒ　Ｅ，Ｈｕｈｔａｌａ　Ｐ，ｅｔ　ａ１．Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　

ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ　ＲＮＡ　ｆｏｒ　Ｍｒ　７２，０００　ａｎｄ　９２，０００　ｔｙｐｅ　ＩＶ　

ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｓｋｉｎ　ｃａｎｃｅｒ　ｂｙ　ｉｎ　ｓｉｔｕ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａ—　

ｔｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，１９９２，５２：１３３６—１３４１