2和MMP-9的表达及意义

2和MMP-9的表达及意义

第31卷第1期

2O1O年3月

扬州大学(农业与生命科学版)

JournalofYangzhouUniversity(AgriculturalandLifeScienceEdition)

VoI.31NO.1

Mar.2O1O

胎膜早破孕妇胎膜组织中NF—KB,COX-2

和MMP一9的表达及意义

孔祥,卢丹,汪萍,周甜甜.

(1.扬州大学临床医学院,江苏扬州225001;2.连云港市第一人民医院,江苏连云港

222002)

摘要:将病例分为绒毛膜羊膜炎组和非绒毛膜羊膜炎组,采用免疫组化SP法检测

32例胎膜早破(PROM)和2O例正

常孕妇胎膜组织中核转录因子B(NF-~B),环氧合酶一2(COX～2)及基质金属蛋白

酶一9(MMP一9)的表达.结果表明:所

有PROM胎膜标本,诊断为绒毛膜羊膜炎者占46.88,正常组中胎膜感染占

1O.0O;PROM组胎膜组织中NF一B,

COX一2,MMP一9表达明显高于对照组孕妇(P<0.05);绒毛膜羊膜炎组胎膜

NF-~B,COX一2,MMP一9表达明显高于非绒

毛膜羊膜炎组(P<O.05);胎膜早破组患者胎膜组织中COX2,MMP-9阳性表达与

NF-~B采用线性相关分析呈明显正

相关关系(P<o.o1).NF—KB,COX一2及MMP一9均参与了PROM的发

病.C02,MMP一9基因的表达受多功能N卜KB

的调控.NF—KB活化可能是PROM发生的关键因素.

关键词:胎儿;胎膜早破;核转录因子B;环氧合酶一2;基质金属蛋白酶一9;免疫组

化

中图分类号:R714.433文献标志码:A文章编号:1671～4652(2010)01—0016—04

ChangesofnuclearfactorkappaB,cyclooxygenase2and

matrixmetalloproteinase一9inprematureruptureofmembrane

KONGXiang,LUDan,WANGPing,ZHOUTian-tian

(ClinMed,YangzhouUniv,Yangzhou225001,China;stHospital,Lianyu

ngang222002,China)

ABSTRACT:Apieceofmembranewasimmediatelycollectedafterlabor,ia

gnosingchorioamnionitis,

allcasesweredividedintotwogroups:chorioamnionitisgroupandnon

immunohisto—

chemicalmethodtOassesstheexpressionofnuclearfactorkappa(NFKB),cyelooxygenase-

2(CoX一2)andmatrixmetal—

loproteinase-9(MMP一

—

9)ultswereasfollows

:

afterHEstain,theinfectionrateinthePR0Mgroupwas46.88%(15/32),whileinthenormalgr

oup,itwas10.00

(2/20);PositiveNF—KB,COX_2andMMP一

9immunoreactivityinfeta1membranesinthePR0Mgroupwassignificantly

higherthanthatjnthenorma1group(P<0.05);TheexpressionofNF-B,COX

2andMMP-9inthechorioamnionitis

groupwashigherthanthatinthenonchorioamnionitisgroup(P<O.05);Therewassignific

antlypositivecorrelation

amongNF—KB,COX一2andMMP一

一

9(P<O.O1).hwasconcludedthatthehighexpressionofNF-KB,COX一2andMMP一9

maypres

sionofCoX一2andMMP一9

wasregulatedbyNF—ivationofNF—

KBmaybeakeypointintheetiologicalfactorofPR0M.

KEYWORDS:fetus;prematureruptureofrrtembrane;nuclearfactorkappaB;cyclooxygen

ase-2;matrixmetalloprotein～

ase一9;immunohistochemistry

胎膜早破(PROM)是指胎膜在临产以前发生破裂,是产科的一种常见并发症Ⅲ,易

导致感染,早产,

脐带脱垂,羊水栓塞,胎儿窘迫,新生儿肺炎,新生儿败血症等并发症,大大增加了围

生期母婴的发病率

和病死率.探究PROM的病因及发病机制已成为当代产科的重要研究课题.

核转录因子一B(NF一B)是近年来发现的一种多效性核转录因子,通常情况下以

二聚体形式存在

收稿日期:2009一O927

基金项目:江苏省社会发展项目(BS2006536);扬州市社会发展项目(YZS2007003)

作者简介:孔祥(1962一),男,江苏泰州人,扬州大学副教授,硕士,主要从事围产医学

研究.

E-mail:*************

第1期孔祥等:胎膜早破孕妇胎膜组织中NF-xB,COX一2和MMP一9的表达及

意义17

细胞质中.当受到细胞因子,病毒及紫外线等因素刺激后,NF—xB活化进人细胞核,

促进多种相关基因

的表达,参与启动并调节机体免疫和炎症反应,凋亡及细胞的增殖分化.国外研究

报道,人类妊娠及产

程进展与妊娠组织中NF—xB活性密切相关l2.].PROM与早产关系密切,研究表

明与妊娠维持,分娩发

动相关的主要是COX一24].MMP9能够降解基底膜的主要成分IV型胶原,导致

胎膜结构薄弱,易于

破裂.有研究表明NF—B参与了COX一2,MMP一9表达的调控_6],但在胎膜早

破组织中的表达研究尚

未见报道.本文研究胎膜早破胎膜组织中NF—B,COX一2和MMP一9的表达,

以探讨其临床意义.

1材料与方法

1.1研究对象

选择2006年l1月至2007年5月在扬州大学附属苏北人民医院妇产科住院的初

产胎膜早破孕妇

32例作为受试对象,分为2组,I组2O例,为足月PROM(tPROM),平均年龄(28.20

±3.38)岁,平均

孕期为(39.14±0.83)周;II组12例,为未足月PROM(pPROM),平均年龄(28.33±

2.57)岁,平均孕

期为(33.99±3.69)周.选取同期住院正常足月妊娠初产妇女20例为对照组,平均年

龄(27.30±

1.56)岁,平均孕期为(39.99±1.06)周.受试组与对照组孕妇均自然分娩,年龄和孕期

间进行比较,无

显着差异.所有病例均无临床感染征象,无母体疾病及其他产科并发症,单胎头位.2

组孕妇均在产后

取胎膜破口处2cm×2cm大小胎膜组织,用消毒棉签去掉蜕膜组织,再用磷酸盐缓

冲液(PBS)冲洗

3次,去掉黏着的血液.10中性福尔马林固定,常规石蜡包埋,用于病理学和免疫组

织化学检测.

1.2诊断标准

1)胎膜早破判定标准:参考第6版《妇产科学》,经下述检查确诊为胎膜早破.①阴

道宫颈消毒

后,在窥器直视下手触宫底见有羊水流出;②pH试验呈碱性;③阴道后穹窿液涂片

检查见胎脂,胎毛

或胎儿上皮细胞.

2)胎盘绒毛膜羊膜炎的病理诊断标准:胎膜标本病理切片常规HE染色,显微镜下

观察,在绒

毛膜及羊膜组织中,每个高倍视野中性粒细胞浸润≥3～4个称为绒毛膜羊膜炎组

(感染组),无绒毛膜

羊膜炎组(无感染组)即每个高倍视野中性粒细胞浸润小于3个或无浸润.

1.3方法

1)主要试剂:NF—B/p65亚单位鼠抗多克隆抗体(工作浓度1:100),COX一2羊抗多

克隆抗(12作

浓度1:150),MMP一9兔抗多克隆抗体(工作浓度1:100)试剂盒,DAB显色试剂盒

均购自北京中杉金

桥生物技术公司.

2)常规HE染色法检测绒毛膜羊膜炎.

3)免疫组化SP法检测胎膜组织中NF—B,COX一2和MMP一9的表达:具体操

作严格按试剂盒说明

书进行,切片常规二甲苯脱蜡,梯度乙醇脱水;微波修复抗原,一抗置4IC冰箱中过

夜,滴加生物素标记

的二抗,37℃温箱孵育30rain,DAB显色,苏木素复染.用已知乳腺癌NF—xB/p65阳

性片作对照.采

用PBS代替一抗作阴性对照.结果判断:NF一~B/p65细胞核内出现明显棕黄色颗

粒为阳性细胞,

COX一2,MMP一9阳性信号定位于胞质.在高倍镜下(×4OO)对每个标本随机选

10个视野进行阳性细胞

计数,根据染色强度及范围分别用"+,++,卅"表示阳性细胞数分别为小于

259/6,25～50及大于

50.细胞数范围小于5定义为"一".

1.4统计学方法

所有数据用SPSS10.0及EXCEI2003软件统计分析.采用t检验,行×列表.检验及

直线相关

分析.

2结果与分析

2.1HE染色行绒毛膜羊膜炎检查

所有胎膜早破胎膜标本,感染者占46.88,其中pPROM患者中胎膜感染占

66.67,tPROM患

者中胎膜感染占35.O0,对照组胎膜感染占1O.()(].

l8扬州大学(农业与生命科学版)第31卷

2.2胎膜组织中NF一~B/p65,COX一2和MMP一9的表达情况

pPROM组胎膜组织中NF一~B/p65,COX一2,MMP一9表达明显高于对照组孕

妇(P值分别为0.028,

0.023,0.012,均小于0.05);tPROM组胎膜组织中NF一~B/p65,COX一2,MMP一9

表达明显高于对照组

孕妇(P值分别为0.022,0.041,0.043,均小于0.05);pPROM组与tPROM组问比较差

异不显着

(表1).

表1胎膜组织中NF-~B/p6S,COX-2及MMP-9的表达

Tab.1TheexpressionofNF-~B/tm5,COX-2andMMP-9infetalmembranesfrom

2.3感染与未感染胎膜组织中/p65,COX一2及MMP一9的表达

由表2可知,绒毛膜羊膜炎组即感染组胎膜NF一~B/p65,COX一2,MMP一9表

达明显高于非绒毛膜羊

膜炎组即无感染组(P值分别为0.016,0.040,0.025,均小于0.05)(见表2).

表2感染与未感染胎膜组织中NF-~B/p65,COX-2及MMP一9的表达

Tab.2TheexpressionofNF-~B/p65,COX-2andMMP-9infetalmembranesfrom

chorioamnionitisgroupandnonchorioamnionitisgroup

2.4NF-KB/p65,COX一2,MMP一9在胎膜早破pPROM组,tPROM组患者胎膜组

织中表达的相关性

比较胎膜早破pPROM组,tPROM组患者胎膜组织中COX一2,MMP一9阳性表

达与NF一~B/p65阳

性表达的关系,采用线性相关分析,NF—IcB与COX一2,NF—IcB与MMP一

9,COX一2与MMP一9,结果呈明

显正相关关系(r分别为0.738,0.532,0.383,P%0.O1).

3讨论

胎膜是胎儿的附属物之一,由绒毛膜和羊膜组成.胎膜的外层为绒毛膜,来源于细

胞滋养细胞的内

层,厚0.O2～0.2mm,主要部分由粗细不等的纤维组成复杂的网状结构,对绒毛膜

的强度起决定作用.

胎膜的内层为羊膜,亦由细胞滋养细胞层衍化而来,与羊膜腔内羊水和胎儿接触,

厚度为0.02～

0.05mm.位于基膜以下的致密层由不溶性的胶原纤维和分泌胶原纤维的纤维母细

胞构成,特别是以

Ⅳ胶原为主,因此胶原纤维的正常结构与功能对保持羊膜的抗张性起着至关重要

的作用.完整的胎膜

能够使羊膜腔内保持一定的羊水量以保护胎儿及母体的安全,并且能够阻挡阴道

病原微生物的上行性

侵入.胎膜早破是指胎膜在临产以前发生破裂,是产科常见的并发症.PROM好发

因素很多,但病因

机制至今尚不清楚.一般认为与以下因素有关,如创伤,宫颈内口松弛,妊娠后期性

交引起机械性刺激

或引起胎膜炎,羊膜腔内压力升高,胎儿先露部与骨盆入口未能很好地衔接,下生

殖道感染及胎膜结构

异常或发育不良等.也有人认为孕妇缺少微量元素锌,铜也可引起PROM.很多流

行病学,临床,组织

学,微生物学和分子生物学资料提示感染或炎症起到了主要的作用.感染是PROM

的重要发病因素之

一

_1

.据报道,与PROM发生关系密切的病原体有溶血性链球菌,淋球菌,沙眼衣原体解

脲支原体,

生殖支原体,弓形虫,淋球菌和某些厌氧菌.病原体经宫颈口感染胎膜,也可经血行

播散至子宫,胎盘,

发生羊膜炎,绒毛膜羊膜炎,使胎膜组织水肿,变脆,强度下降;位于宫颈及阴道穹隆

部的微生物能够产

生膜蛋白水解酶,水解胎膜的细胞外基质,使其强度下降,胎膜易发生破裂.

NF_B是近年来发现的一种多效性核转录因子,通常情况下以二聚体形式及其抑

制蛋白()组成复

合物被阻隔在细胞质中.当受细胞因子,病毒,免疫刺激剂,脂多糖及紫外线等多种

刺激后,磷酸化而

被降解,NF_JcB活化进入核内,促进细胞因子,趋化因子,粘附分子,生长因子,环氧

化酶一2(COX-2),基质

第1期孔祥等:胎膜早破孕妇胎膜组织中NF-~B,COX2和MMP一9的表达及意

义19

金属蛋白酶(MMPs),凋亡相关因子等表达,参与启动并调节机体免疫和炎症反应,

凋亡及细胞的增殖分

化.作者研究发现,PROM组胎膜组织中NF_KB表达明显高于对照组孕妇,患有绒

毛膜羊膜炎组胎膜

NF-~B表达明显高于非绒毛膜羊膜炎组.正常胎膜组织中NF_B主要在胞质中表

达,PROM胎膜组织中

NF-KB的表达增强,主要定位于细胞核表达,细胞核染色呈深棕色.说明PROM胎

膜中NF_JcB活化明显,

NF_B参与了PROM发病u.环氧合酶(COX)即前列腺素合成酶,是花生四烯酸从膜

膦酸酯转化为炎性

因子前列腺素类物质的关键限速酶.现认为至少存在以下2种亚型:COX-1和CoX

一1是一种结

构型酶,在多种组织中微量恒定表达,对外界刺激不敏感,在维持正常生理过程中

起重要作用.COX-2为

诱导型异构酶,正常生理状态下多数组织不表达,当细胞受各种刺激因素包括生长

因子,细胞因子,炎性递

质和激素等作用时,其表达迅速上调.研究表明,与妊娠维持,分娩发动相关的主要

是COX_2l_4].本研究

发现PROM组胎膜组织中CoX_2表达明显高于对照组,绒毛膜羊膜炎组胎膜组织

中COX_2表达明显高

于非绒毛膜羊膜炎组.这可能是随着妊娠的进展,羊膜中的COX_2表达增加,产生

的前列腺素通过自分

泌和旁分泌诱导子宫收缩,宫颈成熟,胎膜破裂,可能为分娩发动的原因之一.在对

胎膜早破发病机制的

研究中,学者们发现胎膜细胞外基质(ECM)的降解失衡是导致胎膜结构薄弱,易于

破裂的重要原因,而基

质金属蛋白酶(MMPs)在ECM的降解中起着最为重要的作用.基质金属蛋白酶是

能有效降解细胞外基

质成分的酶类,根据其降解的底物不同,分为4类(间质胶原酶,明胶酶类,基质溶解

素和膜型基质金属蛋

白酶),其中MMP一9属于明胶酶类.明胶和Ⅳ型胶原的降解在胎膜结构的弱化上

起着重要的作用,而

MMP-9可特异性地作用于明胶和Ⅳ型胶原,从而诱发胎膜破裂.Romeror等¨1胡

发现,自发性胎膜破裂伴

分娩孕妇胎膜组织中MMPs的活性明显升高,MMP-9水平的升高更为显着,与本

研究结果相符.已经发

现在C0X_2基因的5端flanking区域存在两处NF_KB的结合位点,MMP-9基因

5端一600位置有一处

NF_B的结合位点.本研究表明,NF-B,COX_2,MMP-9在胎膜组织中表达,三者之间

具有明显的正相关

性.初步认为在胎膜早破发病中,NIcB可能通过直接的转录调控或其他间接的作

用对cOX_2,MMP-9

的表达起重要的调控作用.

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(责任编辑刘明寿)

一