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2024年12月29日发(作者：氯是常量元素还是微量元素)
双萤光素酶检测试剂盒
使用前请仔细阅读说明书
产品包装和保存条件
Dual-Luciferase Reporter Assay Kit (100 rxns)
Luciferase Reaction Buffer
Luciferase Reaction Substrate (Lyophilized)
Luciferase Reaction Buffer II
Luciferase Reaction Substrate II (125X)
Lysis Buffer (5X)
试剂盒于-20
o
C保存。Lysis Buffer -20
o
C可保存一年。反应试剂（Luciferase
Reaction Reagent和Luciferase Reaction Reagent II）加入底物后，分装、避光保
存；-70
o
C可保存一年，-20
o
C可保存一个月；避免反复冻融。试剂使用前需平衡
至室温。
实验原理
萤火虫萤光素酶（firefly luciferase, fluc）和海肾萤光素酶（renilla luciferase,
rluc）可分别催化萤光素（luciferin）和腔肠素（coelenterazine）产生生物萤光反
应，反应过程如下图所示。
10 ml
1 vial
10 ml
80 μl
10 ml
在双萤光素酶反应中，首先用Luciferase Reaction Reagent检测fLuc信号；
随后，直接加入Luciferase Reaction Reagent II，将fLuc的信号猝灭，同时产生
rLuc信号。该方法具有操作简单、检测快捷、灵敏度高等优点。
实验步骤
1. 配制试剂
1.1 Lysis Buffer
Lysis Buffer (5X) 用水稀释5倍，配制成工作液；
1.2 Luciferase Reaction Reagent
用Luciferase Reaction Buffer（10 ml）溶解Luciferase Reaction Substrate干粉
（短暂离心再开盖），混匀后分装、避光保存，避免反复冻融；
1.3 Luciferase Reaction Reagent II
用Luciferase Reaction Buffer II（10 ml）稀释、混合Luciferase Reaction Substrate
II（短暂离心再开盖），分装、避光保存，避免反复冻融。
2. 裂解细胞
2.1 细胞裂解时密度应小于95%，细胞生长过密，易导致裂解不充分；质粒瞬
转、病毒感染细胞后，需培养一段时间（一般48小时）使萤光素酶充分表达；
调节实验参数，以满足上述条件；
2.2 去除培养基，用PBS润洗一遍，注意不要将细胞吹起；加入适量的1X Lysis
Buffer，推荐用量见下表；
Multiwell Plate
6-well
12-well
24-well
48-well
96-well
2.3 将细胞培养板置于摇床上，室温、轻晃孵育15分钟；
2.4 将裂解物转移到新的EP管中，4
o
C、12,000rpm离心10分钟，取上清备用。
3. 萤光检测
3.1 取20μl裂解物，加入100μl平衡至室温的Luciferase Reaction Reagent，混
匀后于酶标仪中检测fLuc信号；
3.2 然后加入100μl平衡至室温的Luciferase Reaction Reagent II，混匀后于酶标
仪中检测rLuc信号。
Lysis Buffer/Well
500 μl
200 μl
100 μl
50 μl
30 μl
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