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2024年12月29日发(作者：冠军制造者澳大利亚)

蛋白质印迹技术

蛋白质印迹（Western blotting）是一种检测固定在固相基质上的蛋

袋或杂交盒；胶片；保鲜膜；滤纸；0. 22μm孔径的硝酸纤维素膜。

试剂 (1) Running Buffer (Tris-甘氨酸电泳缓冲液，1×2500ml) ; 25

mmol/L Tris 7. 55g 250mmol/L甘氨酸 47. 0g 10%SDS 25m1 (2)

白质的免疫化学办法，又称免疫印迹（immunoblotting )。1979年，

Transfer Buffer ( Tris-甘氨酸电转膜缓冲液，1× 2500m1，pH＝8.3）：

Towbin等将分析DNA的Southern blotting技术扩展到蛋白质的讨论

48 mmol/L Tris 14. 50g 39mmol/L 甘氨酸 7. 25g 10% SDS 9. 25ml

领域，并且和特异、敏捷的免疫分析技术相结合，称之为“Western

20％ 甲醇 500m1 (3) TTBS缓冲液（pH 7.5，2 ×2500ml)： 20 mmol/L

blotting"（蛋白质印迹）。免疫印迹可分为两个步骤：将蛋白质由凝

Tris 12. l l g 0. 5 M NaCl 146. 1 g 0.05%Tween 20 2. 5 ml (4)

胶转移至固相基质上；特异性抗体检测。 试验原理 蛋白质印迹法是将

Stripping Buffer（pH2. 0，1000m1)： 甘氨酸 1. 8768 SDS 10. 0g

蛋白质混合样品经SDS-PAGE后，分别为不同的条带，其中含有能与特

(5) 10％牛奶封闭液： 称取10. 0g脱脂奶粉，溶于80m1 TTBS（pH7.

异性抗体相结合的待检测的蛋白质（抗原蛋白），将凝胶上的蛋白质以

5 )中，搅拌彻低溶解，后加入TTBS定容至100m1，再加入10μl

电转印的方式，转印至固相支持物（如硝酸纤维素膜，NC膜）上，再

Thimerosal混匀。 (6) 10 ×丽春红染液 丽春红 2. 0g 三氯乙酸

用特异抗体作为探针对靶蛋白举行检 测的办法。因为该办法结合了

30.0g 磺基水杨酸 30. 0g 蒸馏水 100m1 (7）第一抗体（以β-actin

PAGE的高辨别率和固相免疫反应的高特异性等多种优点，可检测到低

为例）。 (8) 酶联其次抗体（如：辣根过氧化物酶标志的羊抗鼠二抗）。

至1-5 ng的中等分子量大小的靶蛋白。 仪器和材料 电转移装置（电

操作步骤 蛋白质经SDS-PAGE分别后，必需从凝胶中转移到固相支持

源）；摇床；暗匣；转印夹；浅盘（30cm×15cm×3cm)；玻璃棒；杂交

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本文标签： 蛋白质 印迹 免疫 转印

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