枸杞多糖对HepG2细胞胰岛素抵抗的改善作用及机制研究

５６８

，，（）

ＣｈｉｎＪＡｐｐｌＰｈｙｓｉｏｌ２０１７３３６

枸杞多糖对

Ｈ

细胞胰岛素抵抗的改善作用及机制研究



ｅｐＧ２

许拓

１

，凌宏艳

１＋

，龙

Δ

，

Δ

佳

２

，何剑琴

１

，杨丝丝

１

，朱责梅

１

，颜灿群

２

奉水东

３

（南华大学生理学教研室，

２

附属第二医院内分泌科，

３

社会医学与卫生事业管理学教研室，湖南衡阳

４

）

１．．．２１００１

【摘要】目的：观察不同浓度的枸杞多糖（）对

Ｈ

细胞胰岛素抵抗的影响并探讨其机制。方法：采用高糖

ＬＢＰｅｐＧ２

４

高胰岛素处理

Ｈ

细胞

２

建立胰岛素抵抗细胞模型后，用台盼蓝检测活力大于

９

细胞，以

１

孔

ｅｐＧ２４ｈ５％

的

ＨｅｐＧ２０／

密度接种于

９

孔板内，细胞贴壁后以

３

、、的

Ｌ

培养

４

，

２

，各组均设

４

个复

６０ｇ／ｍｌ１００ｇ／ｍｌ３００ｇ／ｍｌＢＰ８ｈ００ｌ／ｗｅｌｌ

μμμμ

孔。检测不同浓度的

Ｌ

对

Ｈ

细胞活性及胰岛素抵抗的影响；细胞内丙二醛（）含量和超氧化物歧化酶

ＢＰｅｐＧ２ＭＤＡ

）的活性；各组细胞胰岛素信号转导通路中相关蛋白（、、、）的表达。结果：

Ｍ

显示：与正（

ＳＯＤＩＲＳ２ＰＩ３ＫＡｋｔＧＬＵＴ２ＴＴ

同时

Ｉ

、、、蛋白表达水平明显常对照组相比，

ＩＲ

模型组

ＭＤＡ

含量显著升高，

ＳＯＤ

活力明显降低，

ＲＳ２ＰＩ３ＫＡｋｔＧＬＵＴ２

下降；与

Ｉ

中、高浓度

Ｌ

组

Ｍ

且

Ｉ

、、、

Ｒ

模型组相比，

ＢＰＤＡ

的含量明显降低，

ＳＯＤ

的活力显著升高，

ＲＳ２ＰＩ３ＫＡｋｔＧＬＵＴ２

蛋白表达水平明显升高；在相同的时间内，随着

Ｌ

在同一浓度干预下，随着时间的

ＢＰ

浓度的增加，

ＯＤ

值逐渐降低；

延长，葡萄糖消耗实验表明中、高浓度的

Ｌ

细胞的葡萄糖消耗

ＯＤ

值也逐渐降低；

ＢＰ

可显著提高胰岛素抵抗

ＨｅｐＧ２

对

Ｈ

细胞葡萄糖消耗量无明显影响。结论：中、高浓度枸杞多糖能改善

Ｈ

细胞胰岛素量，而低浓度

ＬＢＰｅｐＧ２ｅｐＧ２

抵抗，其作用机制可能与降低细胞氧化应激水平及提高胰岛素信号传导通路相关蛋白表达有关。

【关键词】枸杞多糖；

Ｈ

细胞；胰岛素抵抗；氧化应激；胰岛素信号通路

ｅｐＧ２

【中图分类号】

Ｒ

；

５８７．２Ｒ７４２

【】

１ＤＯＩ０．１２０４７／ｊ．ｃｊａｐ．５５２４．２０１７．１３４

【文献标识码】

Ａ

【文章编号】

１

（）

０００６８３４２０１７０６５６８０４

Ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｓａｎｄｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｌｙｃｅｕｍｂａｒｂａｒｕｍ

ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｏｎｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆＨｅｐＧ２ｃｅｌｌ

１１＋２１１１

，

Ｌ

，

Ｌ

，

Ｈ

，

Ｙ

，

Ｚ

，

ＸＵＴｕｏＩＮＧＨｏｎｇｙａｎＯＮＧＪｉａＥＪｉａｎｑｉｎＡＮＧＳｉｓｉＨＵＺｅｍｅｉ

２３

Δ

，

Ｆ

Δ

ＹＡＮＣａｎｑｕｎＥＮＧＳｈｕｉｄｏｎｇ

（，

２

，

３１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ．ＴｈｅＳｅｃｏｎｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｏｕｔｈＣｈｉｎａ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＳｏｃｉａｌ

，

Ｕ

，

Ｈ

，

Ｃ

）

ＭｅｄｉｃｉｎｅａｎｄＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅＭａｎａｇｅｍｅｎｔｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｏｕｔｈＣｈｉｎａｅｎｇｙａｎｇ４２１００１ｈｉｎａ

【】

Ｏ

：

Ｔ

（）

ｏＡＢＳＴＲＡＣＴｂｊｅｃｔｉｖｅｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｌｙｃｅｕｍｂａｒｂａｒｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅＬＢＰｎｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓａｎｄｉｎｖｅｓｔｉ

：

Ｉ

，

ＭｅｔｈｏｄｓＲＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｍｏｄｅｌｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｗｉｔｈｈｉｇｈｇｌｕｃｏｓｅａｎｄｈｉｇｈｉｎｓｕｌｉｎｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｆｏｒ２４ｈｏｕｒｓｗｉｔｈｇａｔｅｉｔｓｐｏｓｓｉｂｌｅｍｅｃｈａｎｉｓｍ．

４

，

ｈ

（、、）

Ｌ

，，

／ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎｉｎｔｈｅ９６ｗｅｌｌｐｌａｔｅｓｏｌｅｄｅｎｓｉｔｙａｆｔｅｒａｄｈｅｒｅｎｔｃｅｌｌｓ３０ｇ／ｍｌ１００ｇ／ｍｌ３００ｇ／ｍｌＢＰｃｕｌｔｉｖａｔｅ４８ｈ２００ｌ／ｈｏｌｅ１０

μμμμ

ｅａｃｈａｌｌｈａｄｆｏｕｒｈｏｌｅｓ．ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＬＢＰａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｎＨｅｐＧ２ｃｅｌｌａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄ．Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ

（）

ｃ

（）

ａｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅＭＤＡｏｎｔｅｎｔａｎｄｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅＳＯＤｃｔｉｖｉｔｙｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｉｎｓｕｌｉｎｓｉｇｎａｌ

（），

ｐ

（），

ｐ

（）

ａＩＲＳ２ｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ３ｋｉｎａｓｅＰＩ３ＫｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＢＡｋｔｎｄｇｌｕｃｏｓｅｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｐａｔｈｗａｙｓｓｕｃｈａｓｉｎｓｕｌｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒｓｕｂｓｔｒａｔｅ２

（）

ｗ

：

Ｃ

，

ｔｔｒａｎｓｐｏｒｔ２ＧＬＵＴ２ｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．ＲｅｓｕｌｔｓｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＭＤＡｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙａｎｄｔｈｅ

，，

ａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＳＯＤａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＩＲＳ２ＰＩ３ＫＡｋｔａｎｄＧＬＵＴ２ｗｅｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｔｈｅＩＲｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈ

，

ｍｅｄｉｕｍａｎｄｈｉｇｈｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆＬＢＰｄｅｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＭＤＡａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＳＯＤａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＩＲｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ

，

Ｐ

，

Ａ

，

ｔｌｅｖｅｌｓｏｆＩＲＳ２Ｉ３ＫｋｔａｎｄＧＬＵＴ２ｉｎｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｔＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓ．ＭＴＴｓｈｏｗｅｄｔｈａｔａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅｈｅＯＤｖａｌｕｅｇｒａｄｕａｌｌｙｄｅ

’；

ｕ

，

ｔｃｒｅａｓｅｄｗｉｔｈｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｏｆＬＢＰｓｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｎｄｅｒｔｈｅｓａｍｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＬＢＰｈｅＯＤｖａｌｕｅａｌｓｏｇｒａｄｕａｌｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄｗｉｔｈｔｈｅｅｘｔｅｎ

，

ｗｈｉｃｈｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔＬＢＰｉｎｈｉｂｉｔｅｄｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓｗｉｔｈｔｉｍｅａｎｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒ．Ｇｌｕｃｏｓｅｃｏｎｓｉｏｎｏｆｔｉｍｅ

ｓｕｍｐｔｉｏｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｍｅｄｉｕｍａｎｄｈｉｇｈｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＬＢＰｃｏｕｌｄｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅｇｌｕｃｏｓｅｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎｏｆｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｔＨｅｐＧ２

，

ｂｃｅｌｌｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｕｔｌｏｗｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＬＢＰｈａｄｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｉｍｐａｃｔｅｄｏｎｇｌｕｃｏｓｅｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎｏｆｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｔＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓ．Ｃｏｎｃｌｕ

：

Ｍ

，

ｉｅｄｉｕｍａｎｄｈｉｇｈｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＬＢＰｃａｎｉｍｐｒｏｖｅｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｎｓｍａｙｂｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｄｅｃｒｅａｓｉｎｇｓｉｏｎ

ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓａｎｄｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｉｎｓｕｌｉｎｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ．

【】

ｌ

；

Ｈ

；

ｉ

；

ｏ

；

ｉＫＥＹＷＯＲＤＳｙｃｅｕｍｂａｒｂａｒｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｅｐＧ２ｃｅｌｌｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓｎｓｕｌｉｎｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ



【基金项目】教育部留学归国基金（教外司留［］；

２０１４１６８５

号）

湖南教育厅（）；衡阳市科技局（）

１６Ｃ１４１１２０１６ＫＪ６４

【收稿日期】

２

修回日期】

２０１６１１２１

【

０１７０６２９

△

【通讯作者】

Ｔ

：

８

；

Ｅ

：

ｓｅｌ６０７３４８２８１６２１ｍａｉｌｈｕｉｄｏｎｇｆ＠ｈｏｔｍａｉｌ．

胰岛素抵抗（，

Ｉ

）是

２

型糖尿

ｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅＲ

病（，）的重要发病机制之

ｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓＴ２ＤＭ

］

１２

一，伴随

Ｔ

，另外

Ｉ２ＤＭ

发生发展的整个过程

［

Ｒ

是

肥胖、高血压、动脉粥样硬化等代谢相关疾病的共同

；

ｃｏｍ

＋

：并列第一作者

中国应用生理学杂志，，（）

２０１７３３６

］

３

病理生理基础

［

。因此，寻找改善

ＩＲ

药物日益被人

们所重视。

５６９

高浓度

Ｌ

组（）、中浓度

３００ｇ／ｍｌＢＰＨＬＢＰ１００ｇ／ｍｌ

μμ

组（）、低浓度

Ｌ

）。

ＬＢＰＭＬＢＰ３０ｇ／ｍｌＢＰ

组（

ＬＬＢＰ

μ

将

９

孔板中的

Ｈ

细胞弃去旧培养基，换上含高

６ｅｐＧ２

糖高胰岛素的

Ｄ

。药物干预组

ＭＥＭ

培养基培养

２４ｈ

相应浓度的药物处理

４

。上分别给予

２００ｌ／ｗｅｌｌ８ｈ

μ

述各组再分别用含和不含胰岛素的培养基进行培

养。

２

后葡萄糖氧化酶



过氧化物酶法（

４ｈＧＯＤＰＯＤ

法）测定每孔细胞的培养基中葡萄糖的含量，通过与

未接种细胞的空白孔的葡萄糖含量均值相减，计算

每孔细胞葡萄糖的消耗量。

１．５ＭＤＡ

含量、

ＳＯＤ

活力的测定

按照试剂盒说明书顺序加入反应液，比色法测

定

ＭＤＡ

含量和

ＳＯＤ

活力。

检测各组

Ｉ

、、、

１．６ＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔＲＳ２ＰＩ３ＫＡｋｔ

蛋白的表达

ＧＬＵＴ２

提取各组细胞蛋白进行蛋白定量后，取蛋白样

品

３

进行电泳，转膜、封闭、加入抗

Ｉ

、

０ｇＲＳ２ＰＩ

μ

、、抗体孵育，洗涤后加入辣根过氧化酶

３ＫＡｋｔＧＬＵＴ２

标记的二抗，孵育，充分洗涤后与

ＥＣＬ

化学发光试

剂反应，曝光后扫描，用图像分析软件进行光密度分

析

１．７

统计学处理

各组实验数据计量资料用均数

±

标准差（

ｘ±

珋

）表示，采用

Ｓ

统计分析软件进行分析，多

ｓＰＳＳ１９．０

组间比较用

ＡＮＯＶＡ

方差分析。

，）枸杞多糖（

ｌｙｃｅｕｍｂａｒｂａｒｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅＬＢＰ

是从枸杞中提取出来的具有多种生物活性的大分子

］

４

。研物质，是枸杞发挥各种作用的主要成分之一

［

究显示：能提高链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠

ＬＢＰ

视网膜超氧化物歧化酶（，）

ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅＳＯＤ

］

５７

活力，降低丙二醛（，）水平

［

；

ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅＭＤＡ

可以改善

ＨＬＢＰｅｐＧ２

细胞的胰岛素抵抗；

ＬＢＰ

也能

］

８

降低

２

型糖尿病患者血糖、升高胰岛素水平

［

。这

改善胰岛素抵抗、抗氧些研究提示：

ＬＢＰ

在降血糖、

化应激等方面均有较好的效果，但目前尚无对其分

子机制的研究。为此，本研究观察不同浓度的

ＬＢＰ

对

Ｈ

细胞胰岛素抵抗的影响并探讨其机制。

ｅｐＧ２

１

材料与方法

１．１

主要试剂

细胞由湖南省南华大学附属第二医院临

ＨｅｐＧ２

床研究所馈赠，枸杞多糖购自上海江莱生物科技有

限公司，

Ｄ

公司，血清购

ＭＥＭ

培养基购于美国

Ｇｉｂｃｏ

于美国

Ｈ

公司，。

ＳｙｃｌｏｎｅＭＴＴ

粉购于美国

ＳｉｇｍａＯＤ

和

Ｍ

兔抗

ＤＡ

测试盒购于南京建成生物研究所；

多克隆抗体购于美国

ｓ

，兔抗

ＰＧＬＵＴ２ｔａｎｔＩ３Ｋ

多克

隆抗体购于美国

Ｃ

，兔抗

Ａ

多克隆抗体购于美

ＳＴｋｔ

，兔抗

Ｉ

多克隆抗体购于

Ａ

。国

ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈＲＳ２ｂｃａｍ

细胞胰岛素抵抗模型的建立

１．２ＨｅｐＧ２

将处于对数生长期的

ＨｅｐＧ２

细胞用胰蛋白酶

消化后，离心

５ｍ

收集细胞，加新鲜培

１０００ｒ／ｍｉｎｉｎ

养液吹打细胞成单细胞悬液，调整细胞密度为

６

，均匀接种于

９

待细胞贴壁

１０ｃｅｌｌｓ／ｍｌ６

孔培养板中，

后，更换为含高糖高胰岛素的

ＤＭＥＭ

培养基培养

２４

２

结果

细胞增殖的影响

２．１

枸杞多糖对

ＨｅｐＧ２

在相同的时间内，随着

ＬＢＰ

浓度的增加，

ＯＤ

值

逐渐降低；在同一干预浓度下，随着时间的延长，

ＯＤ

值也逐渐降低，呈时间



量效关系。但同一浓度在

２４

和

４

的

Ｏ

而

７

与

２

、

８ｈＤ

值间没有明显差异，

２ｈ４ｈｈ

相比，）。从曲线可以

４８ｈＯＤ

值明显降低（

Ｐ＜０．０５

看出，当浓度为

０

的

Ｌ

细

～３００ｇ／ｍｌＢＰ

作用

ＨｅｐＧ２

μ

胞

４

，对细胞活力无显著性影响，当

Ｌ

浓度超过

８ｈＢＰ

，细胞

Ｏ

，图

１

）。

３００ｇ／ｍｌＤ

值明显下降（

Ｐ＜０．０５

μ

因此，为了排除

Ｌ

本实验选

ＢＰ

对细胞活力的影响，

、、枸杞多糖处理细择

３０ｇ／ｍｌ１００ｇ／ｍｌ３００ｇ／ｍｌ

μμμ

胞

４

。

８ｈ

细胞葡萄糖消

２．２

枸杞多糖对胰岛素抵抗

ＨｅｐＧ２

耗的影响

细胞用高糖高胰岛素培养

２

后，其葡

ＨｅｐＧ２４ｈ

萄糖消耗量较正常组降低

４

表明高糖高胰岛

５．９％

，

素可诱导

Ｈ

细胞胰岛素抵抗。与

ＩｅｐＧ２Ｒ

模型组相

比，无胰岛素刺激时，、、

ＨＬＢＰＭＬＢＰＬＬＢＰ

组葡萄

，通过葡萄糖消耗实验判断胰岛素抵抗细胞模型的

ｈ

建立。

１．３ＭＴＴ

比色法

用台盼蓝检测活力大于

９

细胞，以

５％

的

ＨｅｐＧ２

４

孔密度接种于

９

细胞贴壁后加入

０

、

１０／６

孔板内，

、、、、、

１００３００５００１０００３０００５０００ｇ／ｍｌ７

个浓度的

μ

，每孔

２

，各组均设

４

个复孔。培养

２

、、

ＬＢＰ００ｌ４４８

μ

后，每孔加入

５ｍ

，

７２ｈｇ／ｍｌＭＴＴ２０ｌ３７℃

，

５％ＣＯ

２

μ

继续孵育

４ｈ

，将每孔里面的上清小心吸弃，然后加

入二甲基亚砜，每孔加入

１

，混匀后用

Ｂ５０ｌｉｏＴｅｋ

μ

酶标仪分析在

４

）值，取均值

９０ｎｍ

处的吸光度（

ＯＤ

并绘制生长曲线。

１．４

葡萄糖消耗实验

实验细胞分

５

组：正常对照组（）、

ＣＩＲ

模型组、

５７０

，，（）

ＣｈｉｎＪＡｐｐｌＰｈｙｓｉｏｌ２０１７３３６

糖消耗量皆显著升高；有胰岛素抵抗刺激时，

Ｈ

、

ＬＢＰＭＬＢＰ

组葡萄糖消耗显著升高，

ＬＬＢＰ

组葡萄

糖消耗量无显著性差异（图

２

）。

、

２．４

枸杞多糖对胰岛素抵抗

ＨｅｐＧ２

细胞

ＩＲＳ２

、、和

Ｇ

蛋白表达的影响

ＡｋｔＰＩ３ＫＬＵＴ２

结果显示：与正常对照组相比，

ＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔＩＲ

模型组细胞

Ｉ

、、、和

Ｇ

蛋白表达水

ＲＳ２ＡｋｔＰＩ３ＫＬＵＴ２

）；与

Ｉ

平显著降低（

Ｐ＜０．０５Ｒ

模型组相比，

ＨＬＢＰ

组、、、、和

ＧＭＬＢＰ

组细胞

ＩＲＳ２ＡｋｔＰＩ３ＫＬＵＴ２

蛋白

表达水平显著升高（，图

３

），

Ｐ＜０．０５ＬＬＢＰ

组轻微

升高，差异不具有统计学意义。

Ｆｉｇ．１ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄｔｉｍｅｏｆＬＢＰｏｎｃｅｌｌｓ

（，

ｎ

）

ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈ７２ｈｇｒｏｕｐｘ±ｓ＝３

珋



Ｐ＜

；

＃

Ｐ＜０．０５ｖｓ２４ｈｇｒｏｕｐ０．０５ｖｓ４８ｈｇｒｏｕｐ

Ｆｉｇ．２ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎＬＢＰｏｎｇｌｕｃｏｓｅｃｏｎｓｕｍｐ

（，

ｎ

）

ｔｉｏｎｏｆｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｔＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓｘ±ｓ＝６

珋

：

Ｃ

：

Ｉ

：

Ｉ

；

Ｌ

：

ＬＣｏｎｔｒｏｌＲｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅＢＰｙｃｅｕｍｂａｒｂａｒｕｍ

ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ



Ｐ

；

＃

Ｐ＜０

；

Δ

Ｐ＜０＜０．０５ｖｓｃｏｎｔｏｒｌ．０５ｖｓＩＲｇｒｏｕｐ．０５

，

Ａ

，

ＰＦｉｇ．３ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＬＢＰｏｎｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＩＲＳ２ｋｔＩ

，

ａ

（，

ｎ３ＫｎｄＧＬＵＴ２ｉｎｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｔＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓｘ±ｓ＝

珋

）

５

：

Ｉ

；

Ｌ

：

ＬＩＲｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅＢＰｙｃｅｕｍｂａｒｂａｒｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ



Ｐ＜

；

＃

Ｐ＜０．０５ｖｓｃｏｎｔｏｒｌｇｒｏｕｐ０．０５ｖｓＩＲｇｒｏｕｐ

ｖｓｎｏｎｉｎｓｕｌｉｎｇｒｏｕｐ

细胞

ＭＤ２．３

枸杞多糖对胰岛素抵抗

ＨｅｐＧ２Ａ

含

量和

ＳＯＤ

活力的影响

与正常对照组相比，

ＩＲ

模型组细胞

ＭＤＡ

含量

升高

６

与

Ｉ１％

，

ＳＯＤ

活力降低

２９．９％

；

Ｒ

模型组相

比，、而

ＳＨＬＢＰＭＬＢＰ

组

ＭＤＡ

含量显著降低，

ＯＤ

活

力显著升高（，表

１

）。

Ｐ＜０．０５

Ｔａｂ．１ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＬＢＰｏｎｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆ

ＭＤＡａｎｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＳＯＤｏｆｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｔＨｅｐＧ２

（，

ｎ

）

ｃｅｌｌｓｘ±ｓ＝６

珋

Ｇｒｏｕｐ

Ｃｏｎｔｒｏｌ

ＩＲ

ＨＬＢＰ

ＭＬＢＰ

ＬＬＢＰ

（）

ＭＤＡｎｍｏｌ／ｍｇ

５．５４６±０．３４５



８．９３１±０．２８８

＃

６．８５９±０．３６４

＃

６．５３４±０．４６４

３

讨论

随着人们的生活方式发生改变，全球糖尿病尤

其是

２

型糖尿病（，）的发

ｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓＴ２ＤＭ

病率逐渐上升，目前全球约

３

亿糖尿病患者，预计

．５

］

９

到

２

年将会有

５

。胰岛素抵抗是

Ｔ０５０．５２

亿

［

２ＤＭ

的始发因素，是

Ｔ

逐渐成为糖

２ＤＭ

的重要发病基础，

］

１０

尿病医学研究的重点

［

。早期干预

ＩＲ

的发生或许

可以有效防治

２

型糖尿病，成为

２

型糖尿病治疗的

新方向。

ＩＲ

的形成主要是由于胰岛素信号转导通

路受阻，或者通路中关键蛋白作用减弱而使胰岛素

，］

１１１２

不能发挥其正常的生理作用

［

，是胰岛素抵抗发

（）

ＳＯＤＵ／ｍｇ

１５．９２６±０．３６６



１１．１６８±０．３３１

＃

１４．４２２±０．１８４

＃

１４．７４４±０．２９５

＃

１２．３５２±０．２７２

生的重要机制，通路中无论哪一个信号分子结构或

功能的异常均可导致胰岛素抵抗。随着对

ＩＲ

的进

一步研究，发现氧化应激水平的升高与胰岛素抵抗

，］

１３１４

的发生密切相关

［

。枸杞多糖在抗氧化应激、降

血糖、改善胰岛素抵抗方面均有较好的作用，但其具

体机制尚无报道。

Ｈ

是一

ｅｐＧ２

细胞来源于肝细胞，

种与肝细胞极为相似的肝胚胎瘤细胞株，保留了肝

８．５２１±０．２４２

：

Ｉ

；

Ｌ

：

ＬＩＲｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅＢＰｙｃｅｕｍｂａｒｂａｒｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａ

；

Ｍ

：

Ｍ

；

Ｓ

：

ＳｒｉｄｅＤＡａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅＯＤｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ



；

＃

Ｐ＜Ｐ＜０．０５ｖｓｃｏｎｔｏｒｌ０．０５ｖｓＩＲｇｒｏｕｐ

中国应用生理学杂志，，（）

２０１７３３６

］

１５

细胞许多生物学特性

［

，故本实验通过采用高糖高

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Ｃ

，

Ｌ

，

Ｚ

，

ｅ８ａｉＨＺｉｕＦＫｕｏＰＧｔａｌ．Ｐｒａｃｔｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆａｎ

ｔｉｄｉａｂｅｔｉｃｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｌｙｃｉｕｍｂａｒｂａｒｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｉｎｐａ

［］，

２

，

１

（）：

ｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓＪ．ＭｅｄＣｈｅｍ０１５１４

３８３３９０．

［］

Ｗｈ

，

Ｇ

，

Ｗｅ

，

ｅ９ｉｔｉｎｇＤＲｕａｒｉｇｕａｔａＬｉｌＣｔａｌ．ＩＤＦｄｉａｂｅｔｅｓａｔ

：

ｇｌａｓｌｏｂａｌｅｓｔｉｍａｔｅｓｏｆｔｈｅｐｒｅｖａｌｅｎｃｅｏｆｄｉａｂｅｔｅｓｆｏｒ２０１１

［］，

２

，

９

（）：

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［］，

２

，

７

（）：

１ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅＪ．ＣｕｒｒＰｒｏｔｅｉｎＰｅｐｔＳｃｉ００６２３２１．

［］

Ｃ

，

Ｙ

，

Ｚ

，

ｅ１２ｈｉＭｅＹｈａｎｇＸＤｔａｌ．Ｉｎｓｕｌｉｎｉｎｄｕｃｅｓｄｒｕｇｒｅｓｉｓ

ｔａｎｃｅｉｎｍｅｌａｎｏｍａｔｈｒｏｕｇｈａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＰＩ３Ｋ／Ａｋｔｐａｔｈ

［］，

２

，

２

（）：

２ｗａｙＪ．ＤｒｕｇＤｅｓＤｅｖｅｌＴｈｅｒ０１４８５５２６２．

细胞建立胰岛素抵抗模型，采用胰岛素诱导

ＨｅｐＧ２

检测不同浓度

Ｌ

处理

Ｈ

细胞

２

、、

ＭＴＴＢＰｅｐＧ２４ｈ４８ｈ

。

４

与

２

处理组在

３７２ｈ８ｈ４ｈ００ｇ／ｍｌＬＢＰ

作用下

μ

。观察不同浓度细胞活力无显著差异，故选择

４８ｈ

处理对胰岛素抵抗

Ｈ

细胞

ＳＬＢＰｅｐＧ２ＯＤ

活力、

ＭＤＡ

含量及

Ｉ

胰岛素信号通路相关蛋白表达

ＲＳＰＩ３ＫＡｋｔ

的影响。结果显示：在胰岛素刺激时，各组的葡萄糖

消耗量较无胰岛素时显著升高，说明

ＬＢＰ

可以促进

胰岛素介导的葡萄糖消耗。

Ｈ

、

ＬＢＰＭＬＢＰ

组

ＭＤＡ

含量显著降低，表明

ＬＳＯＤ

活力显著升高，

ＢＰ

通过

升高胰岛素抵抗

Ｈ

细胞

Ｓ

降低

ＭｅｐＧ２ＯＤ

的活力，

ＤＡ

的含量提高细胞的抗氧化、清除氧自由基的能力而

改善细胞胰岛素抵抗。

Ｈ

、

ＬＢＰＭＬＢＰ

的

ＩＲＳＰＩ３Ｋ

胰岛素信号通路相关蛋白表达水平显著升高，

Ａｋｔ

表明

ＬＢＰ

能通过增加胰岛素信号通路中的相关蛋

白水平从而改善

Ｈ

细胞的胰岛素抵抗。

ｅｐＧ２

综上所述：枸杞多糖能改善

Ｈ

细胞胰岛素

ｅｐＧ２

抵抗，其作用机制可能与降低细胞氧化应激水平及

提高胰岛素信号传导通路中

Ｉ

、、、

ＲＳ２ＰＩ３ＫＡｋｔＧＬＵＴ２

的蛋白表达有关。

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