柔荑软珊瑚Nephthea sp.中两种具有细胞毒活性的甾醇化合物

维普资讯

２００８年第２８卷　

第５期，８６１～８６４　

有机化学　

Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　

ＶＯｌＪ　２８．２ｏｏ８　

Ｎ０．５．８６１～８６４　

・

研究简报・　

柔荑软珊瑚Ｎｅｐｈｔｈｅａ　ｓｐ＿中两种具有细胞毒活性的甾醇化合物　

徐石海米　廖小建　林慧　

（暨南大学化学系广州５　１０６３２）　

摘要采用抗肿瘤活性追踪法对采自中国南海西沙群岛永兴岛柔荑软珊瑚Ｎｅｐｈｔｈｅａ　ｓｐ．中抗肿瘤活性成分进行研究，　

报道了两种具有细胞毒活性的甾醇化合物，经过ＭＳ，ＩＲ，　Ｈ　ＮＭＲ，　Ｃ　ＮＭＲ（ＤＥＰＴ），ＨＳＱＣ和ＨＭＢＣ等光谱技术鉴定　

为：２４一甲基胆甾一５一烯一３ｆｌ，８ｆｌ－ｚ．醇（１）和２４一亚甲基胆甾一４一烯一　，够二醇（２），化合物１为新化合物，利用Ｘ—ｒａｙ单晶衍射技　

术验证化合物２的立体结构．化合物１对肝癌细胞（ＢＥＬ一７４０２），小鼠白血瘤细胞（Ｐ３８８）和人结肠癌细胞（ＬＯＶＯ）作用的　

ＩＣ５０值分别为１８．０，２５．５和２０．６Ｉ－ｔｇ／ｍＬ；化合物２对肿瘤细胞Ｐ３８８和人乳腺癌细胞（ＭＣＦ）作用的ＩＣ５０值分别为１．０和２．５　

￣ｔｇｌｍＬ．　

关键词软珊瑚；Ｎｅｐｈｔｈｅａ　ｓｐ；甾醇；抗肿瘤活性　

Ｔｗｏ　Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　Ｓｔｅｒｏｌｓ　ｆｒＯｍ　ｔｈｅ　Ｓｏｆｔ　Ｃｏｒａｌ　Ｎｅｐｈｔｈｅａ　ｓｐ．　

ＸＵ，Ｓｈｉ—Ｈａｉ米ＬＩＡＯ

Ｘｉａｏ—Ｊｉａｎ　

，

ＬＩＮ，Ｈｕｉ　

（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｊｉｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５１０６３２）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｔｗｏ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ｓｔｅｒｏｌｓ　ｈａｖｅ　ｂｅｅｎ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｎｅｐｈｔｈｅａ　ｓｐ．ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ｒｏｍ　ｆＸｉｓｈａ　ｉｓｌａｎｄｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　

Ｓｏｕｔｈ　Ｃｈｉｎａ　Ｓｅａ　ｂｙ　ｂｉｏａｓｓａｙ．ｇｕｉｄｅｄ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｉｒ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｗｅｒｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ａｓ　２４一ｍｅｔｈｙｌｃｈｏｌｅｓｔａｎ一５一　

ｅｎｅ一３ｆｌ，８ｆｌ－ｄｉｏｌ（１）ａｎｄ　２４一ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｃｈｏｌｅｓｔａｎ一４一ｅｎｅ一３　，６ｆｌ－ｄｉｏｌ（２）ｂｙ　ＭＳ，ＩＲ，　Ｈ　ＮＭＲ，”Ｃ　ＮＭＲ（ＤＥＰＴ），　

ＨＳＯＣ　ａｎｄ　ＨＭＢＣ　ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｓｔｅｒｏｌ　１　ｉｓ　ａ　ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ　ｕｎｋｎｏｗｎ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｎｄ　ａｈｅ　ｔｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｏｆ　ｓｔｅｒｏｌ　２　

ｈａｓ　ｂｅｅｎ　ｖａｌｉｄａｔｅｄ　ｂｙ　Ｘ—ｒａｙ　ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｔｉｍｅ．Ｓｔｅｒｏｌ　１　ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ　ａｇａｉｎｓｔ　

ＢＥＬ一７４０２，Ｐ３８８　ａｎｄ　Ｌ０Ｖ０　ｃｅｌｌｓ（ＩＣ５ｏ　１８．０，２５．５　ａｎｄ　２０．６￣ｔｇ／ｍＬ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）．Ｓｔｅｒｏｌ　２　ａｌｓｏ　ｓｈｏｗｅｄ　ｓｉｇ—　

ｎｉｉｆｃａｎｔ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｐ３８８　ｎｄ　ａＭＣＦ　ｃｅｌｌｓ（ＩＣ５ｏ　１．０　ｎｄ　ａ２．５￣ｇ／ｍＣ．ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）．　

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　ｃｏｒａｌ；Ｎｅｐｈｔｈｅａ　ｓｐ．：ｓｔｅｒｏｌ；ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ　

甾醇类化合物是珊瑚次生代谢产物的一大家族，不　

仅结构新颖、变化多样，而且具有广泛的生物活性，ＰＩ：　

抗肿瘤、抗真菌、抗菌、抗病毒和抗污染等活性【ｌ￣５】．正　

是由于结构的多样性和生物活性的广谱性，引起了众多　

的化学家和药物学家的关注．同时随着现代分离技术的　

发展、测试条件的改善及药学水平的提高，越来越多结　

构奇特、微量的活性甾醇化合物不断从珊瑚中发现．这　

不仅推动有机化学和药物化学的发展，而且为治疗人类　

疑难疾病开辟了新药方向．柔夷软珊瑚Ｎｅｐｈｔｈｅａ　ｓｐ．属　

于腔肠动物门，珊瑚虫纲，八方珊瑚虫亚纲，软珊瑚亚　

Ｅ—ｍａｉｌ：ｔｘｕｓｈ　ｎｕ．ｅｄｕ．ｃａ　

目，Ｎｅｐｈｔｈｅｉｄａｅ科，珊瑚体呈黄褐色，有许多触手．目　

前从软珊瑚Ｎｅｐｈｔｈｅｉｄａｅ科中发现不少的活性化合物，　

主要是萜类化合物、甾醇类化合物［６￣１１】．我们以抗肿瘤　

活性追踪法，对采自西沙群岛永兴岛的软珊瑚Ｎｅｐｈｔｈｅａ　

ｓｐ．的抗肿瘤活性成分进行研究，报道了两个抗肿瘤活　

性的甾醇化合物：２４一甲基胆甾一５一烯一３　，８　二醇（１）３１　２４一　

亚甲基胆甾一４一烯一３　，６ｆｌ一二醇（２）（图１），其中化合物１为　

新化合物，化合物２首次利用Ｘ—ｒａｙ单晶衍射技术验证　

其立体结构．体外抗肿瘤活性实验表明，两种甾醇化合　

物对肝癌细胞（ＢＥＬ一７４０２）、小鼠白血瘤细胞（Ｐ　）、人结　

Ｒｅｃｅｉｖｅｄ　Ａｕｇｕｓｔ　７，２００７；ｒｅｖｉｓｄ　ｅＯｃｔｏｂｅｒ　６，２００７；ａｃｃｅｐｔｅｄ　Ｎｏｖｅｍｂｅｒ　２６，２００７．　

国家８６３基金（Ｎｏ．２００６ＡＡ０９Ｚ４０８）、国家自然科学基金（Ｎｏ．２０７７２０４８）、广东省科技计划基￣（Ｎｏｓ．０６０２５１９４，２００５Ａ３０５０３００１）、广州市计划基金（Ｎｏ．　

２００６Ｚ３一Ｅ４０４１）资助项目．　

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８６２　有机化学　、，０１．２８．２００８　

２８　２８　

１结果与讨论　

甾醇１：白色固体，ｍ．Ｐ．１６２～１６４℃（乙酸乙酯），　

ＥＩＭＳ显示分子离子失水峰３９８（Ｍ　一Ｈ２０），ＦＡＢＭＳ显　

示分子离子峰ｍ／ｚ　４１６（Ｍ　），结合　Ｈ　ＮＭＲ和　Ｃ　ＮＭＲ　

确定该甾醇分子式为Ｃ２８Ｈ４８Ｏ２，ＨＲＦＡＢＭＳ［Ｍ＋Ｎａ】＋　

４３９．３６０４（计算值为４３９．３５５２）进一步确证该甾醇分子式　

推导的正确性，此甾醇不饱和度为５．　

Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ．Ｂｕｒｃｈａｒｄ反应表现为阳性，说明该物质　

为甾醇类化合物，同时　Ｈ　ＮＭＲ和　Ｃ　ＮＭＲ表明该化合　

物具有正常的甾醇骨架，因此，只要对羟基和双键位置　

进行归属就可以确定甾醇的结构．ＤＥＰＴ（Ｄｉｓｔｏｒｔｉｏｎｌｅｓｓ　

ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ　ｂｙ　ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ　ｔｒｎａｓｆｅｒ）谱显示２８个碳，分　

别为６个ＣＨ３，１０个ＣＨ２，８个ＣＨ和４个Ｃ；通过ＨＳＱＣ　

（Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ　ｓｉｎｇｌｅ　ｑｕａｎｔｕｍ　ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ）逐个对”Ｃ　

ＮＭＲ和　ＨＮＭＲ进行归属（表１）．　

低场区良１４２．７（ｓ），１２２．４（ｄ）及　５．２９（ｄｄ，　＝１．８，　

５．４　Ｈｚ，Ｈ．６）说明分子中含有一个三取代的双键，　Ｈ．　Ｈ　

ＣＯＳＹ（Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）￣相关关系表明双键的　

位置处于Ｃ．５和Ｃ．６之间（图２）；良７４．２（ｓ），７２．６（ｄ）及　

３．４０￣３．４３（ｍ，１Ｈ），结合ＥＩＭＳ　ｍ／ｚ　３９８［Ｍ—Ｈ２０］　和　

３８０［Ｍ一２Ｈ２０】＋说明分子中含有两个羟基．另外，特征　

峰ｍ／ｚ　２８９［Ｍ～Ｃ９Ｈ１９】　表明甾醇侧链为Ｃ９Ｈ１９，同时也　

进一步说明羟基和双键均在甾核上．ＨＭＢＣ（Ｈｅｔｅｒｏｎｕ－　

ｃｌｅａｒ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ．ｂｏｎｄ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ）显示Ｃ．８（　７４．２）与Ｈ．７，　

Ｈ．９及Ｈ．１４有相关关系，Ｈ．１９与Ｃ．１，Ｃ．１０，Ｃ．５及Ｃ．９　

有相关关系，这些相关关系表明Ｃ．８位上有一个羟基．　

ＨＭＢＣ还显示Ｈ．２１与Ｃ．１７，Ｃ．２０及Ｃ．２１有相关关系，　

Ｈ．２８与Ｃ．２３，Ｃ．２４及Ｃ．２５有相关关系，Ｈ．２７与Ｃ．２４，　

Ｃ．２５及Ｃ．２６有相关关系，说明Ｃ．２４位上有一个甲基，　

从而可以推导出甾醇１的结构．ＮＯＥＳＹ（Ｎｕｃｌｅａｒ　ｏｖｅｒ．　

ｈａｕｓｅｒ　ｅｆｆｅｃｔ　ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）显示相关关系Ｈ３．１９／Ｈ．２ａ，　

Ｈ３－１９／Ｈ－４ａ，Ｈ－３／Ｈ－４ｂ，Ｈ－７／Ｈ－１４，Ｈ３－１８／Ｈ－１　１，Ｈ３－１９／　

Ｈ．２０，说明Ｃ．３位的羟基处于　构型，甾核四个环处于　

表１甾醇１的　ＨＮＭＲ和　ＣＮＭＲ（ＭｅＯＤ为溶剂）　

Ｔａｂｌｅ　１　Ｈ　ＮＭＲ　ａｎｄ　Ｃ　ＮＭＲ　ｓｐｅｃｔｒａｌ　ｄａｔａ　ｆｏｒ　Ｉ（ｓｏｌｖｅｎｔ　

ＭｅＯＤ）　

一

１Ｈ一１ＨＣＯＳＹ＼√：ＨＭＢＣ　

图２甾醇１的　Ｈ一　Ｈ　ＣＯＳＹ与ＨＭＢＣ的主要相关关系　

Ｖｉｇｕｒｅ　２　Ｈ＿１Ｈ　ＣＯＳＹ　ａｎｄ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ｋｅｙ　ＨＭＢＣ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　

ｓｔｅｒｏｌ１　

反式，从而推断Ｃ一８位的羟基处于　构型，２１－甲基为０ｃ　

构型，最后确定甾醇１的结构为２４．甲基胆甾．５．烯．　

，　．

二醇（图３）．　

甾醇２：白色棱状晶体，通过　Ｈ　ＮＭＲ，　Ｃ　ＮＭＲ和　

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Ｎ０．５　徐石海等：柔荑软珊瑚Ｎｅｐｈｔｈｅａ　ｓｐ．中两种具有细胞毒活性的甾醇化合物８６３　

通过ｘ射线单晶衍射实验进一步证实甾醇２的立体　

结构（图４）．甾醇化合物２的晶体学数据列于表２，本文　

首次通过Ｘ—ｒａｙ射线验证甾醇２的立体化学．　

体外抗肿瘤活性测试表明两种甾醇对肿瘤细胞　

ＢＥＬ一７４０２，Ｐ３ＲＲ，ＬＯＶＯ和ＭＣＦ具有一定的抑制作用，　

图３甾醇１的主要ＮＯＥ相关关系　

Ｆｉｇｕｒｅ　３　Ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ＮＯＥＳＹ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｓｔｅｒｏｌ　１　

其中，甾醇１对ＢＥＬ一７４０２，Ｐ３８８和ＬＯＶＯ作用的ＩＣ５ｏ分　

别为１８．０，２５．５和２０．６￣ｔｇ／ｍＬ；甾醇２对Ｐ３８８和ＭＣＦ作　

用的ＩＣ５０分别为１．０和２．５￣ｔｇ／ｍＬ．　

ＤＥＰＴ谱推定出其分子式为Ｃ２８Ｈ４６Ｏ２，不饱和度为６．　

Ｈ　ＮＭＲ和”Ｃ　ＮＭＲ谱显示分子中含有一个末端双键：　

４．７０（ｄ，Ｉ，一１　Ｈｚ，１Ｈ），４．６５（ｓ，１Ｈ）；５ｃ　１０６．６（ｔ），１５６．７　

２实验部分　

２．１仪器与试剂　

ＮＩＣＯＬＥＴ　５ＤＸ—ＦＴ红外光谱仪：ＡＶＡＮＣＥ一５００型　

核磁共振仪；ＶＧ—ＺＡＢ质谱仪；ＭＡＴ９５ＸＰ高分辨质谱　

仪；Ｓｍａｒｔｌ０００ＣＣＤ　Ｘ射线单晶衍射仪；ＢＩＯＲＡＤ一６８０全　

自动酶标仪；ＸＤＳ一１Ｂ显微镜；不锈钢手提式压力蒸汽　

灭菌器；国产显微熔点仪，温度计未校正；薄层层析及　

柱层析用硅胶Ｈ（４０￣ｔｒｎ），青岛海洋化工厂生产．原材　

（ｓ）；一个三取代双键：　５．３９（Ｓ，１Ｈ），５ｃ　１４７．１　１（ｓ），１２９．９　

（ｄ）；两个仲羟基：　４．０３（Ｓ，１Ｈ），３．９９～４．０１（ｍ，１Ｈ），５ｃ　

７３．７（ｄ），６７．５０（ｄ）；５个甲基：　０．７４（Ｓ，３Ｈ），０．９７（ｄ，Ｉ，一　

６．５　Ｈｚ，３Ｈ），１．００（ｄ，Ｊ＝２．８　Ｈｚ，３Ｈ），１．０２（ｄ，Ｊ＝２．９　Ｈｚ，　

３Ｈ），１．２４（Ｓ，３Ｈ）．　Ｈ　ＮＭＲ和”Ｃ　ＮＭＲ表明化合物具有　

２４一亚甲基胆甾醇的侧链结构『１　，角甲基１９在吡啶溶剂　

的化学位移值５ｃ　１８．８５明显移向低场，表明除了Ｃ一３　

ＯＨ外分子中的另一个ＯＨ可能是在Ｃ一　或Ｃ一６ｐ位．将　

料采集于中国南海西沙群岛永兴岛，编号为２００１—１１，　

种属由中国南海海洋研究所邹仁林研究员鉴定．　

化合物的波谱数据与文献［１３】比较，鉴定化合物２为２４一　

亚甲基一胆甾一４一烯一３　，　一二醇．　

表２甾醇２的晶体学数据　

Ｔａｂｌｅ　２　Ｃｒｙｓｔａｌ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｄａｔｅ　ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｓｔｅｒｏｌ　２　

Ｆｏｒｍｕｌａ　

Ｍｆ　

Ｃ２ｓＨ４６０２　

４１４．６５　

“／ｍｍ～

Ｃｒｙｓｔａｌ　ｓｉｚｅ／ｍｍ３　

０．０７　

０

５０￣０．４０　Ｘ　０．２０　

．

Ｃｒｙｓｔａｌ　ｓｙｓｔｅｍ　

Ｓｐａｃｅ　ｇｒｏｕｐ　

Ｏｒｔｈｏｒｈｏｍｂｉｅ　

Ｐ２１／Ｃ　

０　

Ｒａｄｉｔｉａｏｎ　

２．８４。～２１．５４。　

ＭＯＫａ　

Ｔ／Ｋ　２７３（２）　Ｃｅｌｌ　ｐａｒａｍｅｎｔｅｒｓ　Ｆｒｏｍ　９６５　

ａ／Ａ　

ｂ／￣　

ｃ／￣　

ＷＡ。　

Ｚ　

ＤＪ（Ｍｇ・ｍ　）　

８．１６８（３）　

１　０．９３３（３）　

２８．４４６（８）　

２５４０．２（１３）　

４　

１．０８４　

Ｒ（Ｆ２＞２ｏ＇Ｆ２）　

ｗＲ（　）

Ｓ　

（△　）　

△ｐ　／（ｅ・Ａ一。）

△　商ｘ／（ｅ・Ａ一。）　

０．０６１　

０．２１５　

１．０２　

＜０．００１　

０．３４　

－０．２２　

壤一

ｃ（５）Ｉｉ　

ｃ（６）　

一　

ｂ　

Ｃ（２７）　

ｃ（２６）　

Ｃ（２８）　

ｏ（２）藿　

图４甾醇２的分子结构　

Ｆｉｇｕｒｅ　４　Ｍｏｌｅｃｕｌｒ　ｓｔａｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｓｔｅｒｏｌ　２　

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有机化学　Ｖ＿ｏ１．２８．２００８　

２．２提取分离　

将柔荑软珊瑚Ｎｅｐｈｔｈｅａ　ｓｐ．（湿重６．０　ｋｇ）用水泡洗后　

剪碎，用９５％乙醇在室温下浸泡１０　ｄ×５，合并浸泡液，　

减压浓缩得褐色膏状物后。用乙酸乙酯溶解膏状物．溶　

解部分用乙酸乙酯一水分配１５次，合并乙酸乙酯相并减　

压浓缩得褐色膏状物７４．３　ｇ．膏状物用１００￣２００目硅胶　

进行快速柱层析，用极性不断增加的石油醚一乙酸乙酯　

混合液洗脱，６５％乙酸乙酯一石油醚冲洗出固体组分Ａ，　

固体Ａ多次重结晶得到２４．亚甲基一胆甾．４．烯．３　，　．二　

醇（２）；７５％乙酸乙酯一石油醚冲洗出固体组分Ｂ，固体Ｂ　

多次柱层析和重结晶得到２４一甲基胆甾一５一烯．３８，８￣－－－醇　

（１）．　

甾醇１：白色固体，ｍ．Ｐ．１６２～１６４℃（乙酸乙酯）；　Ｈ　

ＮＭＲ（ＭｅＯＤ／ＴＭＳ）￣Ｉ”Ｃ　ＮＭＲ（ＭｅＯＤ／ＴＭＳ）数据见表　

１．ＩＲ（ＫＢｒ）ｖ：３４２８，２２８０，１６５３，１５４１，１４６１，１３７２，１０５６，　

１　

７７２　ｃｍ　；ＥＩＭＳ　ｍ／ｚ：３９８【Ｍ—Ｈ２０】十，３８０，２８９，２７１，２５５，　

２１３，１７５，１５４，１０５，９５，５５（基峰）；　

甾醇２：白色棱状晶体，　Ｈ　ＮＭＲ（ＴＨＦ一　厂ｒＭＳ）　：　

５．３９（ｓ，１Ｈ），４．７（ｄ，－－５．３　Ｈｚ，１Ｈ），４．６５（ｓ，１Ｈ），４．０３（ｓ，　

１Ｈ），３．７６～３．９９（ｍ，１Ｈ），１．２４（ｓ，３Ｈ），１．０２（ｄ，　一２．９　Ｈｚ，　

３Ｈ），１．０（ｄ，Ｊ－－２．９　Ｈｚ，３Ｈ），０．９７（ｄ，Ｊ－－６．５　Ｈｚ，３Ｈ），０．７４　

（ｓ，３Ｈ）；”Ｃ　ＮＭＲ（Ｐｒｉｄｉｎｅ－如厂ｒＭＳ）：３７．６（Ｃ－１），４０．２　

（Ｃ一２），７３．７（Ｃ－３），１２９．９（Ｃ－４），１４７．１（Ｃ－５），６７．５（Ｃ－６），　

４０．６（Ｃ－７），３５．９（Ｃ－８），５５．０（Ｃ一９），３７．３（Ｃ一１０），３５．１　

（Ｃ－１　１），３１．３（Ｃ一１２），４２．８（Ｃ－１３），５６．４（Ｃ一１４），３０．１（Ｃ－１５），　

２８．４（Ｃ一１６），５６．３（Ｃ－１７），１２．１（Ｃ－１８），１８．８（Ｃ－１９），３０．９　

（Ｃ一２０），２２．１（Ｃ一２　１），２　１．３（Ｃ－２２），２４．５（Ｃ－２３），１　５６．７　

（Ｃ一２４），３４．１（Ｃ一２５），２１．９（Ｃ一２６），２１．６（Ｃ一２７），１０６．５　

ｆＣ一２８）．　

２．３　Ｘ・ｒａｙ单晶衍射实验　

甾醇２溶解在吡啶溶剂中，在室温下重结晶得到单　

斜晶体。晶体尺寸为０．５０　ｍｍ￣０．４０　ｍｍ×０．２０　ｍｍ．在　

ＢＲＵＫＥＲ　ＳＭＡＲＴ　１０００ＣＣＤ　Ｘ．ｒａｙ单晶衍射仪上进行测　

试，采用石墨单色器，由Ｍｏ　Ｋａ射密度函数修正得到．　

从差值电子密度函数结合几何分析得到全部氢原子的　

线．晶体结构由直接法解出，全部非氢原子由差值　

Ｆｏｕｒｉｅｒ合成及差值电子坐标．全部非氢原子坐标，各向　

异性热参数及氢原子坐标，各向同性热参数经全矩阵最　

小二乘法修正至收敛，所有计算结果均使用ＳＨＥＬＸＴＬ．　

９７软件包完成．　

２．４体外抗肿瘤活性测试　

肿瘤细胞购置于中山大学医学院，按照文献【１４】，　

采用ＭＴＴ（噻唑蓝）法测试甾醇对抗肿细胞的抑制率，应　

用ＳＰＳＳ（ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ｐａｃｋａｇｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｓｏｃｉｌａｓｃｉｅｎｃｅ）软件处　

理数据，重复两次实验，计算Ｉｃ５０值．　

Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ　

Ｄｕｈ，Ｃ．Ｙ．；Ｅ１一Ｇａｍａｌ，Ａ．Ａ．Ｈ．；Ｃｈｕ，Ｃ．Ｊ．；Ｗａｎｇ，Ｓ．Ｋ．；　

Ｄａｉ，Ｃ．Ｆ．　Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．２０ｏ２，６５，１５３５．　

Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｍ．；Ｍａｒｉｎｅ，Ｓ．Ｓｔｅｒｏｉｄｓ　１９９４，５，１３０．　

Ｍａｋｏｔｏ，Ｉ．

４　５　

；Ｋｅｎ，Ｎ．；ＹｏｓＭｙｕ￣，Ｎ．

６　７　８　９

；Ｋａｚｕｏ，Ｉ．Ｓｔ

　Ｏ　１　

ｅｒｏｉｄｓ　

２　

２０ｏ１．６６，２５．　

Ｋａｚｕｋａ，Ｙ．；Ｓａｔｏｅ，Ｋ．；Ｍｉｋａ，Ｈ．；Ｓｈｉｇｅｎｏｂｕ，Ａ．；Ｔｏｍｉｈｉｓａ，　

ｏ．Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．２Ｏ响　６３．６７０．　

Ｓｈａｏ，Ｚ．Ｙ．；Ｚｈｕ，Ｄ．Ｙ．；Ｇｕｏ，Ｙ．Ｗ．Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．２０ｏ２，６５，　

１６７５．　

Ｌｉｎｄａ，Ａ．Ｍ．；Ｃｈｒｉｓｔｉｅ，Ｅ．Ｍ．；Ｊａｓｐｅｒｓ，Ｍ．；Ｏｆｅｗｅｇｅｎ，Ｌ．Ｐ．　

Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．１９９８，６１，５３８．　

Ｖａｎｄｅｒａｈ，Ｄ．Ｊ．；Ｒｕｔｌｅｄｇｅ，Ｎ．；Ｓｃｈｍｉｔｚ，Ｆ．Ｊ．；Ｃｉｅｒｅｓｚｋｏ，Ｌ．　

Ｓ．Ｉ，．Ｄ馏．Ｃ　ｅｍ．１９７８，４３，１６１４．　

Ｋｉｔａｇａｗａ，Ｉ．；Ｃｕｉ，Ｚ．；Ｓｏｎ，Ｂ．Ｗ．；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｍ．；Ｋｙｏｇｏｋｕ，　

Ｙ．Ｃ　ｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌ１．１９８７．３５，１２４．　

Ｇｒｏｓｓ，Ｈ．；Ｋｅｈｒａｕｓ，Ｓ．；Ｎｅｔｔ，Ｍ．；Ｋ６ｎｉｇ，Ｇ．Ｍ．；Ｂｅｉｌ，Ｗ．；　

Ｗｒｉｇｈｔ，Ａ．Ｄ．Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏ１．Ｃｈｅｍ．２００３，１，９４４．　

Ａｎｕｐ，Ｋ．Ｒ．；Ｐｒａｎ，Ｋ．Ｄ．；Ｔａｐａｓ，Ｄ．；Ｐｒａｎｔｏｓｈ，Ｂ．；ＡＩ＇ｕｎ，Ｋ．　

Ｂ．：Ａｍａｒｅｎｄａ，Ｐ．Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．１９９１，５４，８５４．　

Ｇａｎｉｔ，Ｋ．Ｇ．；Ｐｎｉｎａ，Ｋ．；Ａｍｉｒａ，Ｒ．；Ｙｅｈｕｄａ，Ｂ．；Ｍｉｃｈａｅｌ，Ｓ．；　

Ｙｏｅｌ，Ｋ．Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．１９９６，５９，２６２．　

Ａｈｍｅｄ，Ａ．Ｆ．；Ｄａｉ，Ｃ．Ｆ．；Ｋｕｏ，Ｙ．Ｈ．；Ｓｈｅｕ，Ｊ．Ｈ．Ｓｔｅｒｏｉｄｓ　

２０ｏ３．６８．３７７．　

Ｚｅｎｇ，Ｌ．Ｍ．；Ｌｉ，Ｘ．Ｑ．；Ｓｕ，Ｊ．Ｙ．；Ｆｕ，Ｘ．；Ｆｒｎａｃｉｓ，Ｊ．Ｓ．　

Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．１９９５．５８。２９６．　

Ａｌｌｅｙ，Ｍ．Ｃ．；Ｓｃｕｄｉｅｒｏ，Ｄ．Ａ．；Ｍｏｎｋｓ，Ａ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．１９８８，　

４８，５８９．　

（Ｙ０７０８０７１　ＬＩ，Ｌ．　；ＬＩＮＧ￣Ｊ．）　

２　３３